কনফোকাল লেজার মাইক্রোস্কোপির বৈশিষ্ট্য এবং প্রয়োগ
লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ (LSCM) হল এক ধরনের মাইক্রোস্কোপ যা কনজুগেট ফোকাস প্রযুক্তির উপর ভিত্তি করে ডিজাইন করা হয়েছে, অর্থাৎ লেজারের আলোর উৎস, পরীক্ষার অধীনে নমুনা এবং ডিটেক্টর একে অপরের সংযোজিত অবস্থানে।
মৌলিক
সাধারণ অণুবীক্ষণ যন্ত্রে, অবজেক্টিভ লেন্সের ফোকাল প্লেন ডিটেক্টরের সাথে মিলে যায় যাতে পর্যবেক্ষিত ইমেজ প্লেনটি সংলগ্ন অক্ষীয় সমতল থেকে বিচ্ছিন্ন হয়, যখন কনফোকাল মাইক্রোস্কোপে, নমুনাটি একটি বিচ্ছুরণ-সীমিত আলোর স্থান ব্যবহার করে আলোকিত হয়, এবং রেজোলিউশন উন্নত করতে বিপথগামী আলো ফিল্টার করার জন্য স্পট কনজুগেটের ফোকাল পয়েন্টে সংগ্রহের আলো পথের একটি পিনহোল ব্যবহার করে এই বিচ্ছিন্নতা প্রভাব অর্জন করা হয়।
ইমেজিং বৈশিষ্ট্য
শুধুমাত্র সংযোজিত নমুনা স্তর থেকে প্রতিফলিত আলো সংগ্রহের আলো পথের ছোট গর্তের মধ্য দিয়ে যেতে পারে এবং অবশিষ্ট অপ্রাসঙ্গিক নমুনা স্তরের প্রতিফলনগুলি ছোট গর্ত দ্বারা অবরুদ্ধ হয়। এর ফলে রেজোলিউশনে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি হতে পারে। নীচে দেখানো হয়েছে বহুমাত্রিক ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি এবং একই পুরু নমুনার কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির পাশাপাশি তুলনা। যখন বিভিন্ন ফোকাল প্লেনে একাধিক ছবি তোলা হয়, তখন সাধারণভাবে যাকে "জেড-স্ট্যাক" বলা হয় তা তৈরি করা যেতে পারে এবং এই চিত্রটি কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি দ্বারা প্রস্তাবিত রেজোলিউশন এবং বৈপরীত্য লাভ এবং এই লাভের অন্তর্নিহিত কারণগুলি উভয়ই দেখায়। টিস্যুর উপরে ইমেজিং প্লেনের সাথে স্ট্যাকের উপরের চিত্রটি পরীক্ষা করলে ফ্লুরোসেন্স ছবিতে প্রচুর বিক্ষিপ্ত আলো দেখা যায়, যেখানে কনফোকাল চিত্রটি কালো দেখায়। অক্ষীয় দিক থেকে পিএসএফ-এর এই হ্রাস সরাসরি জেড-স্ট্যাকের মাঝখানে অপটিক্যাল ইন্টারফেসে পরিলক্ষিত রেজোলিউশনের পার্থক্যের জন্য দায়ী।
লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির আরেকটি বৈশিষ্ট্য হল এটি একটি স্ক্যানিং ইমেজিং প্রযুক্তি। প্রথাগত ওয়াইড-ফিল্ড ইলুমিনেশন টেকনোলজি পুরো নমুনাকে আলোকিত করে, তাই ইমেজটি সরাসরি খালি চোখে বা একটি ডিটেক্টর দ্বারা ক্যাপচার করা যায়, কিন্তু LSCM একটি রশ্মি ব্যবহার করে বা একাধিক ফোকাসড বিম স্ক্যানিং এবং ইমেজিংয়ের জন্য নমুনার মধ্য দিয়ে যায় এবং ফলস্বরূপ চিত্রটি হয় অপটিক্যাল সেকশন বলা হয়। নিম্নলিখিত প্রথাগত ওয়াইড-ফিল্ড আলোকসজ্জা পদ্ধতি এবং লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল আলোকসজ্জা পদ্ধতির মধ্যে পার্থক্য দেখায়।
অতএব, একটি আধুনিক কনফোকাল মাইক্রোস্কোপের একটি ব্যবহারিক কাজের পদ্ধতি নীচের চিত্রে দেখানো হয়েছে। লেজার দ্বারা নির্গত উত্তেজনা আলো একটি ডাইক্রোয়িক আয়নার মধ্য দিয়ে যায় এবং এক জোড়া কম্পনশীল আয়নার মাধ্যমে নমুনার x এবং y দিক স্ক্যান করে। নমুনার উত্তেজনা (বা প্রতিফলন) আলো পিনহোলের মাধ্যমে পিএমটি ডিটেক্টরে প্রবেশ করে এবং রেকর্ড করা হয়, এবং রেকর্ড করা স্ক্যানিং চিত্রটি প্রকৃত নমুনা চিত্র পাওয়ার জন্য কম্পিউটার দ্বারা পুনর্গঠিত হয়।
