হালকা মাইক্রোস্কোপির জন্য কি নমুনা স্পেসিফিকেশন প্রয়োজন?
অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের নমুনা তৈরির প্রক্রিয়ায়, নমুনার স্লাইস বেধ 2-25um; ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের স্লাইস বেধ 50-100nm এর মধ্যে (উচ্চ-ভোল্টেজ ইলেকট্রন মাইক্রোস্কোপ বাদে, যার নমুনা পুরুত্ব 1um এ পৌঁছাতে পারে), তাই ব্যবহৃত স্লাইস পদ্ধতিটি সব একই নয়।
ক্যারিয়ারের ক্ষেত্রে, অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ বিভাগের বাহক হল গ্লাস স্লাইড, অন্যদিকে ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ বিভাগের বাহক হল গ্রিড।
ফিক্সেশনের ক্ষেত্রে, অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের স্লাইসগুলি একটি যৌগিক ফিক্সেটিভ দিয়ে স্থির করা হয়, যখন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের স্লাইসগুলি একটি একক ফিক্সেটিভ দিয়ে বারবার স্থির করা হয়।
দাগের ক্ষেত্রে, অপটিক্যাল নমুনাগুলির দাগ তুলনামূলকভাবে সহজ। বিভিন্ন পর্যবেক্ষণ নমুনা এবং অপটিক্যাল অণুবীক্ষণ যন্ত্রের ধরন অনুসারে, এটি সাধারণত কিছু নির্দিষ্ট স্টেনিং এজেন্ট দিয়ে দাগ দেওয়ার জন্য যথেষ্ট। ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের নমুনাগুলিকে পুনরায় দাগ দেওয়ার জন্য অনেকগুলি এবং জটিল পদ্ধতি রয়েছে, যেমন নেতিবাচক স্টেনিং, সিলভার স্টেনিং এবং আরও অনেক কিছু।
এমবেডিংয়ের ক্ষেত্রে, প্যারাফিন, কোলোডিয়ন, জেলটিন ইত্যাদি অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ বিভাগের জন্য এমবেডিং এজেন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয়; ইপক্সি রজন, পলিস্টাইরিন রজন, আইসোবিউটিলিন রজন, এবং জল-দ্রবণীয় রজন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ বিভাগের জন্য এমবেডিং এজেন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয়।
মাইক্রোস্কোপের দৃশ্যের ক্ষেত্রটি সমানভাবে এবং সম্পূর্ণরূপে আলোকিত হতে পারে তা নিশ্চিত করার জন্য, মাইক্রোস্কোপটি প্রথম ইনস্টল এবং ডিবাগ করার সময় আলোকসজ্জা অপটিক্যাল সিস্টেমকে সামঞ্জস্য করতে হবে। এটি একটি গুরুত্বপূর্ণ উপায় এবং সঠিকভাবে মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করার এবং সঠিক এবং নির্ভরযোগ্য ফলাফল পাওয়ার সবচেয়ে মৌলিক উপায়। প্রয়োজনীয়তা এছাড়াও, অণুবীক্ষণ যন্ত্র ব্যবহারের সময় আলোর উৎস বাল্ব প্রতিস্থাপন করার পরে আলোকসজ্জা অপটিক্যাল পাথ সিস্টেমের সামঞ্জস্য সঠিকভাবে আয়ত্ত করা একটি প্রয়োজনীয় পদক্ষেপ, এবং এটি প্রতিদিনের সময়ে সময়ে সময়ে মাইক্রোস্কোপের কার্যকারিতা পরীক্ষা করার একটি প্রয়োজনীয় উপায়। ব্যবহার মাইক্রোস্কোপ আলোকসজ্জা অপটিক্যাল পাথ সিস্টেমের সমন্বয়ে প্রধানত নিম্নলিখিত চারটি আইটেম অন্তর্ভুক্ত রয়েছে: 1. মাইক্রোস্কোপের বাইরে আলোর উত্স ল্যাম্প চেম্বারের প্রাথমিক সমন্বয় ① প্রথমে ল্যাম্প চেম্বারের শেলটি খুলুন, হ্যালোজেন বাল্বটি স্থাপন করতে বসন্ত ক্লিপ টিপুন সকেট, এবং ইনস্টলেশনের সময় আপনার আঙ্গুল দিয়ে বাল্বের সাথে সরাসরি যোগাযোগ এড়ান (নরম কাপড় বা কাগজ দিয়ে আলাদা করা যেতে পারে) এড়াতে বাল্বে আঙ্গুলের ছাপ এবং অন্যান্য ময়লা রয়েছে, যা বাল্বের পরিষেবা জীবনকে প্রভাবিত করবে। ②ল্যাম্প হাউসটি টেবিলের উপর রাখুন, পাওয়ার চালু করার পরে, বাতির ফোকাস নব হোল ("←→" দিয়ে চিহ্নিত) সামঞ্জস্য করতে একটি বিশেষ স্ক্রু ড্রাইভার ব্যবহার করুন, যাতে ফিলামেন্টটি দেয়ালে প্রজেক্ট হয় 1-2 মি দূরে, এবং ফিলামেন্ট ইমেজ সমন্বয় করা হয়. তারপরে বাতির উচ্চতা সামঞ্জস্য করুন এবং ফিলামেন্টের অবস্থান উপযুক্ত করতে থ্রেড হোল ("──" দিয়ে চিহ্নিত) সামঞ্জস্য করুন; তারপর ফিলামেন্টের বাম এবং ডান অবস্থান উপযুক্ত করতে স্ক্রু গর্ত ("──" দিয়ে চিহ্নিত) সামঞ্জস্য করতে বাতিটির বাম এবং ডান অবস্থান সামঞ্জস্য করুন।
2. অণুবীক্ষণ যন্ত্রে আলোক উৎস ইলুমিনান্ট (ফিলামেন্ট) এর অবস্থান পরীক্ষা ও সংশোধন করার উদ্দেশ্য হল উদ্দেশ্যমূলক লেন্সের দৃশ্যের ক্ষেত্রে আলোকসজ্জার ইমেজ প্রান্তকে বর্গাকারভাবে সামঞ্জস্য করা এবং নিশ্চিত করা যে দৃশ্যের ক্ষেত্রটি অণুবীক্ষণ যন্ত্রটি আলোর উৎসের দৃষ্টিকোণ থেকে সম্পূর্ণ এবং অভিন্নভাবে আলোকিত। আলো, যা কুহলার আলো ব্যবস্থা সামঞ্জস্য করার জন্য একটি পূর্বশর্ত। প্রয়োজনীয় মৌলিক সরঞ্জাম: মাইক্রোস্কোপ কেনার সময় কেন্দ্রীভূত টেলিস্কোপ সজ্জিত করা হয়। ① ল্যাম্প হাউসে ফ্রস্টেড কাচের হাতা খুলে ফেলুন এবং ল্যাম্প হাউসটিকে আবার মাইক্রোস্কোপে রাখুন। ② একটি 10× অবজেক্টিভ লেন্স বেছে নিন, নমুনা খুঁজে বের করতে আলোর উত্স প্রোগ্রাম চালু করুন এবং এটিকে পরিষ্কারভাবে ফোকাস করুন এবং তারপর নমুনাটিকে পরিষ্কারভাবে ফোকাস করার জন্য একটি 40× অবজেক্টিভ লেন্স ব্যবহার করুন (40× অবজেক্টিভ লেন্স আপনি ফিলামেন্টের পুরো ছবি দেখতে পারবেন ); ③ কনডেনসারের অ্যাপারচার ডায়াফ্রাম এবং ফিল্ড ডায়াফ্রাম সর্বাধিক পর্যন্ত খুলুন; ④ একটি আইপিস আনপ্লাগ করুন, একটি কেন্দ্রীভূত টেলিস্কোপ দিয়ে প্রতিস্থাপন করুন, সাদা অংশটি ধরুন, অন্য হাত দিয়ে কালো আইপিসটি প্রসারিত করুন, আপনি দৃষ্টিক্ষেত্রে ফিলামেন্ট চিত্রটি দেখতে পারেন; ⑤ ফিলামেন্টের অবস্থান উপযুক্ত না হলে, অনুভূমিক দিকে ফিলামেন্ট চিত্র সামঞ্জস্য করতে "──" গর্ত সামঞ্জস্য করুন, এবং ফিলামেন্ট চিত্র সামঞ্জস্য না করা পর্যন্ত উল্লম্ব দিক থেকে ফিলামেন্ট চিত্র সামঞ্জস্য করতে "──" গর্ত সামঞ্জস্য করুন হালকা বৃত্তাকার চিত্রে যা উদ্দেশ্যমূলক লেন্সের অ্যাপারচার পূরণ করে; ⑥ সমন্বয়ের পরে, হিমায়িত কাচের হাতাটি মূল অবস্থানে ঢোকান, কেন্দ্রীভূত টেলিস্কোপটি আনপ্লাগ করুন এবং পরবর্তী সমন্বয়ের জন্য আইপিসটি প্রতিস্থাপন করুন। মাইক্রোস্কোপের বাইরে আলোকিত আলোর উত্স ল্যাম্প চেম্বারের উপরে উল্লিখিত সামঞ্জস্য এবং মাইক্রোস্কোপের ভিতরে আলোর উত্সের উজ্জ্বল দেহের অবস্থান যাচাইকরণ শুধুমাত্র তখনই সম্পন্ন করা প্রয়োজন যখন মাইক্রোস্কোপটি প্রথমে ইনস্টল করা হয় এবং ডিবাগ করা হয় এবং যখন বাল্বটি প্রতিস্থাপন করা হয়। , এবং মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করার সময় মাইক্রোস্কোপ এলোমেলোভাবে সামঞ্জস্য করা যাবে না। বিভ্রান্তির ক্ষেত্রে, উপরের ধাপগুলি অনুসারে এটিকে মূল অবস্থায় ফিরিয়ে আনা যেতে পারে।
3. কোহলার ইলুমিনেশন সিস্টেমের সঠিক সমন্বয় মাইক্রোস্কোপের সঠিক সমন্বয়ের প্রধান কাজগুলির মধ্যে একটি হল আলোকসজ্জা অপটিক্যাল পাথ সিস্টেমের সামঞ্জস্য, এবং মূলটি হল কোহলার আলোকসজ্জা সিস্টেমের সমন্বয়। মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করেন এমন প্রতিটি ব্যক্তির জন্য, বিশেষ করে যারা ফটোমাইক্রোগ্রাফ করেন, তাদের কুহলার আলোকসজ্জা পদ্ধতির নীতি এবং এর সামঞ্জস্যের পদক্ষেপগুলি সম্পর্কে একটি নির্দিষ্ট বোঝা এবং দক্ষতা থাকা উচিত যাতে মাইক্রোস্কোপের কাজগুলিকে সম্পূর্ণ খেলা দেওয়া যায় এবং ছবি তোলা যায়। যে ফটোগুলি বেরিয়ে আসে সেগুলি আরও সামঞ্জস্যপূর্ণ এবং কার্যকর হতে পারে৷ কোহলার ইলুমিনেশন সিস্টেমের নীতিটি সহজভাবে: আলোক উৎস ইলুমিনান্টের যেকোনো বিন্দু দ্বারা নির্গত আলো মাইক্রোস্কোপের দৃশ্যের ক্ষেত্রকে আলোকিত করতে পারে, এবং আলোক উৎস আলোকিতকের প্রতিটি বিন্দু দ্বারা নির্গত আলো সংগ্রহ করা হয়, এবং ক্ষেত্রটিতে অণুবীক্ষণ যন্ত্রের দৃষ্টিতে একটি খুব পূর্ণ এবং অভিন্ন আলোকসজ্জা অর্জন করা হয়। কুহলার লাইটিং সিস্টেম সামঞ্জস্য করার উদ্দেশ্য হল পর্যবেক্ষিত ক্ষেত্রটির জন্য অভিন্ন এবং পর্যাপ্ত আলোকসজ্জা প্রাপ্ত করা এবং বিপথগামী আলোকে ইমেজিং সিস্টেমকে প্রভাবিত বা হস্তক্ষেপ করা থেকে বিরত রাখা, যাতে ফটোগ্রাফির সময় ফিল্মে কুয়াশা এড়ানো যায়। একটি উচ্চ-সামঞ্জস্যপূর্ণ কোহলার আলোকসজ্জা সিস্টেমের জন্য প্রয়োজনীয় উপাদান: ফিল্ড ডায়াফ্রাম, কনডেনসার লেন্স সিস্টেম যা অক্ষে সামঞ্জস্য করা যায়। ① 10× অবজেক্টিভ লেন্স এবং 10× আইপিস নির্বাচন করুন ② কনডেন্সারের সামনের লেন্সটি অপটিক্যাল পাথে রাখুন, অ্যাপারচার ডায়াফ্রামকে একটি মাঝারি অবস্থানে সামঞ্জস্য করুন (খুব বড় বা ছোট নয়), তারপরে কনডেন্সারটিকে তুলুন উপরের অবস্থান, এবং কনডেন্সার টার্নটেবলটিকে উজ্জ্বল ক্ষেত্রের "জে" অবস্থানে সামঞ্জস্য করুন ③ ফিল্ড ডায়াফ্রামটি সর্বনিম্ন (0.1) এ সামঞ্জস্য করুন
④ মঞ্চে সিল করা জৈবিক নমুনা রাখুন, আলোর উত্সটি চালু করুন এবং স্পষ্টভাবে ফোকাস করুন
⑤ দৃশ্যের ক্ষেত্রে একটি আংশিকভাবে আলোকিত এলাকা বা উজ্জ্বল স্পট থাকবে, যা ফিল্ড ডায়াফ্রামের অস্পষ্ট চিত্র, যেখানে নমুনার বিবরণ স্পষ্টভাবে দেখা যাবে; এটির বাইরে একটি অন্ধকার ক্ষেত্র, যা অগত্যা নমুনার বিবরণ পরিষ্কারভাবে দেখতে নাও পারে
⑥কন্ডেন্সারটিকে নীচের দিকে সামান্য সামঞ্জস্য করুন, যাতে দৃশ্যের ক্ষেত্রের উজ্জ্বল স্থানটি ধীরে ধীরে সঙ্কুচিত হয় এবং ধীরে ধীরে একটি পরিষ্কার বহুভুজ চিত্রে পরিণত হয়, যা ফিল্ড ডায়াফ্রামের স্পষ্ট চিত্র;
⑦সাধারণত, বহুভুজ চিত্রটি দৃশ্যের ক্ষেত্রের কেন্দ্রে থাকে না এবং কেন্দ্রীয় অবস্থানে ফিল্ড ডায়াফ্রামের বহুভুজ চিত্রকে সামঞ্জস্য করতে কনডেনসারের একজোড়া কেন্দ্রীভূত স্ক্রু সমন্বয় করা প্রয়োজন;
⑧ বহুভুজ চিত্রটিকে দৃশ্যের ক্ষেত্রের একটি খোদাই করা বহুভুজ করতে দৃশ্যের ক্ষেত্রের ডায়াফ্রামটি ধীরে ধীরে খুলুন এবং আরও সারিবদ্ধ অবস্থা পরীক্ষা করুন৷ যদি প্রান্তিককরণ আদর্শ না হয়, তবে প্রান্তিককরণ স্ক্রুটি সূক্ষ্ম-টিউন করা চালিয়ে যান;
⑨দর্শনের ক্ষেত্রের ডায়াফ্রামটি সামান্য খুলুন, যাতে এর বহুভুজ চিত্রটি দৃশ্যের ক্ষেত্রের প্রান্তে অদৃশ্য হয়ে যায়। এখন পর্যন্ত, কোহলার আলোকসজ্জা সিস্টেমের সমন্বয় সম্পন্ন হয়েছে। কোহলার লাইটিং সিস্টেম সামঞ্জস্য করার পরে, দৃশ্যের পুরো ক্ষেত্রটি সমানভাবে আলোকিত হয় এবং নেওয়া মাইক্রোগ্রাফগুলি স্বাভাবিক বৈপরীত্যের সাথে উজ্জ্বল এবং পরিষ্কার হয়।
