টু-ফোটন ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি কি?
দ্বি-ফোটন উত্তেজনার মূল নীতি হল: উচ্চ ফোটন ঘনত্বের ক্ষেত্রে, ফ্লুরোসেন্ট অণু একই সময়ে দুটি দীর্ঘ-তরঙ্গদৈর্ঘ্যের ফোটন শোষণ করতে পারে এবং তথাকথিত উত্তেজিত অবস্থার জীবনকালের অল্প সময়ের পরে একটি ছোট-তরঙ্গদৈর্ঘ্যের ফোটন নির্গত করতে পারে। . ; প্রভাবটি একটি ফোটন ব্যবহার করার মতো যার তরঙ্গদৈর্ঘ্য একটি ফ্লুরোসেন্ট অণুকে উত্তেজিত করার জন্য দীর্ঘ তরঙ্গদৈর্ঘ্যের অর্ধেক। দ্বি-ফোটন উত্তেজনার জন্য একটি উচ্চ ফোটন ঘনত্ব প্রয়োজন। কোষের ক্ষতি না করার জন্য, দুই-ফোটন মাইক্রোস্কোপি উচ্চ-শক্তি মোড-লক স্পন্দিত লেজার ব্যবহার করে। এই লেজার দ্বারা নির্গত লেজারে উচ্চ শিখর শক্তি এবং নিম্ন গড় শক্তি রয়েছে, এর পালস প্রস্থ মাত্র 100 ফেমটোসেকেন্ড, এবং এর ফ্রিকোয়েন্সি 80 থেকে 100 মেগাহার্টজে পৌঁছাতে পারে। স্পন্দিত লেজারের ফোটন ফোকাস করার জন্য একটি উচ্চ সংখ্যাসূচক অ্যাপারচার অবজেক্টিভ লেন্স ব্যবহার করার সময়, অবজেক্টিভ লেন্সের ফোকাল পয়েন্টে ফোটনের ঘনত্ব সবচেয়ে বেশি হয় এবং দুই-ফোটন উত্তেজনা শুধুমাত্র অবজেক্টিভ লেন্সের ফোকাল পয়েন্টে ঘটে, তাই দুই-ফোটন মাইক্রোস্কোপের একটি কনফোকাল পিনহোলের প্রয়োজন নেই, যা ফ্লুরোসেন্স সনাক্তকরণ দক্ষতা উন্নত করে।
সাধারণ ফ্লুরোসেন্স ঘটনাতে, উত্তেজনা আলোর কম ফোটন ঘনত্বের কারণে, একটি ফ্লুরোসেন্ট অণু একই সময়ে শুধুমাত্র একটি ফোটন শোষণ করতে পারে এবং তারপরে একটি বিকিরণীয় স্থানান্তরের মাধ্যমে একটি ফ্লুরোসেন্ট ফোটন নির্গত করতে পারে, যা একক-ফোটন ফ্লুরোসেন্স। আলোর উত্স হিসাবে লেজার ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স উত্তেজনা প্রক্রিয়ার জন্য, টু-ফোটন বা এমনকি মাল্টি-ফোটন ফ্লুরোসেন্স ঘটতে পারে। এই সময়ে, ব্যবহৃত উত্তেজনা আলোর উত্সের তীব্রতা বেশি, এবং ফোটনের ঘনত্ব একই সময়ে দুটি ফোটন শোষণকারী ফ্লুরোসেন্ট অণুর প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে। উত্তেজনা আলোর উত্স হিসাবে একটি সাধারণ লেজার ব্যবহার করার প্রক্রিয়ায়, ফোটনের ঘনত্ব এখনও দুই-ফোটন শোষণের ঘটনা তৈরি করার জন্য যথেষ্ট নয়। সাধারণত, একটি ফেমটোসেকেন্ড স্পন্দিত লেজার ব্যবহার করা হয় এবং এর তাত্ক্ষণিক শক্তি মেগাওয়াটের ক্রম পর্যন্ত পৌঁছাতে পারে। অতএব, দুই-ফোটন ফ্লুরোসেন্সের তরঙ্গদৈর্ঘ্য উত্তেজনা আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্যের চেয়ে ছোট, যা অর্ধেক উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্যে উত্তেজনা দ্বারা উত্পাদিত প্রভাবের সমতুল্য।
