ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের উদ্দেশ্য, বৈশিষ্ট্য এবং ব্যবহার
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের নীতি এবং কাঠামোগত বৈশিষ্ট্য: ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ উত্তেজনা হিসাবে ফিল্টার সিস্টেমের মাধ্যমে একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলো (যেমন অতিবেগুনী আলো 3650 বা বেগুনি নীল আলো 4200 ইঞ্চি) নির্গত করতে উচ্চ উজ্জ্বল দক্ষতার সাথে একটি বিন্দু আলোর উত্স ব্যবহার করে। নমুনায় ফ্লুরোসেন্সকে উদ্দীপিত করতে আলো। পদার্থটি বিভিন্ন রঙের ফ্লুরোসেন্স নির্গত করার পরে, এটি অবজেক্টিভ লেন্স এবং আইপিসের বিবর্ধনের মাধ্যমে পর্যবেক্ষণ করা হয়। এইভাবে, একটি শক্তিশালী বৈসাদৃশ্য পটভূমির অধীনে, এমনকি যদি ফ্লুরোসেন্স খুব দুর্বল হয়, এটি সনাক্ত করা সহজ এবং উচ্চ সংবেদনশীলতা রয়েছে। এটি প্রধানত কোষের গঠন এবং ফাংশন এবং রাসায়নিক গঠন গবেষণার জন্য ব্যবহৃত হয়। একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের মৌলিক কাঠামো একটি সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ এবং কিছু আনুষাঙ্গিক (যেমন একটি ফ্লুরোসেন্ট আলোর উৎস, একটি উত্তেজনা ফিল্টার, একটি দুই রঙের বিম স্প্লিটার এবং একটি ব্লকিং ফিল্টার ইত্যাদি) দিয়ে গঠিত। ফ্লুরোসেন্ট আলোর উৎস—সাধারণত অতি-উচ্চ চাপ পারদ বাতি (50-200W) ব্যবহার করে, যা বিভিন্ন তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলো নির্গত করতে পারে, কিন্তু প্রতিটি ফ্লুরোসেন্ট পদার্থের একটি উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য থাকে যা সবচেয়ে শক্তিশালী ফ্লুরোসেন্স তৈরি করে, তাই একটি উত্তেজনা ফিল্টার (সাধারণত, অতিবেগুনী, বেগুনি, নীল এবং সবুজ উত্তেজনা ফিল্টার আছে), যা শুধুমাত্র একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের উত্তেজনা আলোকে অন্য আলো শোষণ করার সময় নমুনাকে বিকিরণ করতে দেয়। প্রতিটি পদার্থ উত্তেজনা আলো দ্বারা বিকিরণিত হওয়ার পরে, এটি খুব অল্প সময়ের মধ্যে বিকিরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্যের চেয়ে দীর্ঘতর তরঙ্গদৈর্ঘ্য সহ দৃশ্যমান প্রতিপ্রভ নির্গত করে। ফ্লুরোসেন্স নির্দিষ্ট এবং উত্তেজনা আলোর তুলনায় সাধারণত দুর্বল। নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্স পর্যবেক্ষণ করার জন্য, উদ্দেশ্যমূলক লেন্সের পিছনে একটি ব্লকিং (বা দমনকারী) ফিল্টার প্রয়োজন।
এর দুটি কাজ রয়েছে: একটি হল উত্তেজক আলোকে আইপিসে প্রবেশ করা থেকে শুষে নেওয়া এবং ব্লক করা, যাতে ফ্লুরোসেন্স বিরক্ত না হয় এবং চোখের ক্ষতি না হয়; অন্যটি হল একটি নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্ট রঙ দেখানো, নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্সকে নির্বাচন করা এবং তার মধ্য দিয়ে যেতে দেওয়া। দুটি ফিল্টার একসাথে ব্যবহার করতে হবে।
তাদের অপটিক্যাল পাথের পরিপ্রেক্ষিতে দুটি ধরণের ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ রয়েছে:
1. ট্রান্সমিশন ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ: উত্তেজনা আলোর উত্সটি নমুনা উপাদানের মধ্য দিয়ে একটি কনডেনসার লেন্সের মাধ্যমে ফ্লুরোসেন্সকে উত্তেজিত করার জন্য প্রেরণ করা হয়। একটি অন্ধকার ক্ষেত্রের সংগ্রাহক সাধারণত ব্যবহার করা হয়, এবং একটি সাধারণ সংগ্রাহকও আয়না সামঞ্জস্য করতে ব্যবহার করা যেতে পারে যাতে উত্তেজনা আলোকে পুনঃনির্দেশিত করা হয় এবং নমুনায় বাইপাস করা হয়। এটি একটি পুরানো ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপ। সুবিধা হল যে ফ্লুরোসেন্স কম ম্যাগনিফিকেশনে শক্তিশালী, কিন্তু অসুবিধা হল যে ম্যাগনিফিকেশন বাড়ার সাথে সাথে প্রতিপ্রভা কমে যায়। অতএব, বড় নমুনা উপকরণ পর্যবেক্ষণ করা ভাল।
2. এপি-ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ আধুনিক সময়ে বিকশিত একটি নতুন ধরনের ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ। পার্থক্য হল যে উত্তেজনা আলো বস্তুনিষ্ঠ লেন্স থেকে নমুনার পৃষ্ঠে নিচে পড়ে, অর্থাৎ, একই উদ্দেশ্যমূলক লেন্স আলোকসজ্জা কনডেনসার এবং ফ্লুরোসেন্স সংগ্রহের জন্য উদ্দেশ্যমূলক লেন্স হিসাবে ব্যবহৃত হয়। আলোর পথে একটি ডাইক্রোইক বিম স্প্লিটার যোগ করতে হবে, যা হালকা ইউরেনিয়াম থেকে 45 ডিগ্রি দূরে। উত্তেজনা আলো বস্তুনিষ্ঠ লেন্সে প্রতিফলিত হয় এবং নমুনায় সংগ্রহ করা হয়। নমুনা দ্বারা উত্পন্ন ফ্লুরোসেন্স এবং অবজেক্টিভ লেন্সের লেন্স পৃষ্ঠ এবং কভার গ্লাস পৃষ্ঠ দ্বারা প্রতিফলিত উত্তেজনা আলো একই সময়ে উদ্দেশ্য লেন্সে প্রবেশ করে এবং উত্তেজনা আলো তৈরি করতে দুই রঙের বিম স্প্লিটারে ফিরে আসে। , অবশিষ্ট উত্তেজনা আলো ফিল্টার ব্লক দ্বারা শোষিত হয়. যেমন বিভিন্ন উত্তেজনা ফিল্টার/টু-কালার বিম স্প্লিটার/ব্লকিং ফিল্টারের সংমিশ্রণে পরিবর্তন করা, এটি বিভিন্ন ফ্লুরোসেন্ট প্রতিক্রিয়া পণ্যের চাহিদা মেটাতে পারে। এই ধরনের ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের সুবিধা হল যে দৃশ্যের ক্ষেত্রের আলোকসজ্জা সমান, ইমেজিং পরিষ্কার এবং বৃহত্তর বিবর্ধন, ফ্লুরোসেন্স তত শক্তিশালী।
(2) ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ কিভাবে ব্যবহার করবেন।
1. আলোর উত্সটি চালু করুন এবং অতি-উচ্চ চাপের পারদ বাতিটিকে উজ্জ্বলতম বিন্দুতে পৌঁছানোর জন্য কয়েক মিনিটের জন্য গরম করতে হবে৷
2. ট্রান্সমিশন ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপকে আলোর উৎস এবং কনডেনসারের মধ্যে প্রয়োজনীয় উত্তেজনা ফিল্টার ইনস্টল করতে হবে এবং উদ্দেশ্য লেন্সের পিছনে সংশ্লিষ্ট ব্লকিং ফিল্টার ইনস্টল করতে হবে। এপি-ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলিকে অপটিক্যাল পাথের স্লটে প্রয়োজনীয় উত্তেজনা ফিল্টার/ডুয়াল-কালার বিম স্প্লিটার/ব্লকিং ফিল্টার সন্নিবেশ করাতে হবে।
3. একটি লো-ম্যাগনিফিকেশন লেন্স দিয়ে পর্যবেক্ষণ করুন, এবং আলোর উত্সের কেন্দ্রটি সামঞ্জস্য করুন যাতে এটি বিভিন্ন মডেলের ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের সমন্বয় ডিভাইস অনুসারে সমগ্র আলোকসজ্জার স্থানের কেন্দ্রে অবস্থিত থাকে।
4. নমুনা টুকরা রাখুন এবং ফোকাস করার পরে পর্যবেক্ষণ করুন। ব্যবহারের সময় মনোযোগ দেওয়া উচিত: শেষ ফিল্টারের সাথে সরাসরি পর্যবেক্ষণ করবেন না, যাতে চোখের ক্ষতি না হয়; তেল লেন্স দিয়ে নমুনাগুলি পর্যবেক্ষণ করার সময়, আপনাকে অবশ্যই ফ্লুরোসেন্স ছাড়াই একটি বিশেষ তেল লেন্স ব্যবহার করতে হবে; উচ্চ-চাপের পারদ বাতিটি বন্ধ হয়ে যাওয়ার পরে, এটি অবিলম্বে আবার চালু করা যাবে না, এটি পরীক্ষা করা দরকার। এটি 5 মিনিটের পরে পুনরায় চালু করা যেতে পারে, অন্যথায় এটি অস্থির হবে এবং পারদ বাতির জীবনকে প্রভাবিত করবে।
(3) পর্যবেক্ষণ শিক্ষণ প্ল্যাটফর্মে একটি ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপের নীচে একটি নীল-বেগুনি আলোর ফিল্টার ব্যবহার করে, এটি দেখা যায় যে ও. অ্যাক্রিডিন কমলা ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক দ্বারা দাগযুক্ত কোষগুলির 01 শতাংশ, নিউক্লিয়াস এবং সাইটোপ্লাজম দুটি ভিন্ন রঙের ফ্লুরোসেন্স (গাঢ় সবুজ এবং কমলা লাল) তৈরি করতে উত্তেজিত হয়।
