স্টেনিং কৌশল এবং অণুজীবের মাইক্রোস্কোপিক পর্যবেক্ষণ
1। উদ্দেশ্য
1.1 মাইক্রোবিয়াল স্মিয়ার এবং স্টেনিংয়ের প্রাথমিক কৌশলগুলি শিখুন।
1.2 ব্যাকটেরিয়ার সহজ স্টেনিং পদ্ধতি আয়ত্ত করুন।
1.3 প্রাথমিকভাবে ব্যাকটেরিয়ার অঙ্গসংস্থানগত বৈশিষ্ট্যগুলি বুঝুন এবং কীভাবে তেল লেন্স এবং অ্যাসেপটিক অপারেশন কৌশলগুলি ব্যবহার করতে হয় সে সম্পর্কে জ্ঞানকে একীভূত করুন৷
2 নীতি
জীবাণুবিদ্যা পরীক্ষায় ব্যাকটেরিয়া দাগ দেওয়া এবং দাগ দেওয়া একটি মৌলিক কৌশল। ব্যাকটেরিয়া কোষগুলি ছোট এবং স্বচ্ছ, একটি সাধারণ হালকা মাইক্রোস্কোপের অধীনে তাদের সনাক্ত করা কঠিন করে তোলে; তারা দাগ করা আবশ্যক. ব্যাকটেরিয়া রঞ্জিত করার জন্য একটি একক রঞ্জক ব্যবহার করা হয়, যাতে দাগযুক্ত ব্যাকটেরিয়া পটভূমি থেকে একটি স্পষ্ট রঙের পার্থক্য তৈরি করে, যাতে তাদের আকারবিদ্যা এবং গঠন আরও স্পষ্টভাবে লক্ষ্য করা যায়। এই পদ্ধতিটি পরিচালনা করা সহজ এবং ব্যাকটেরিয়া কোষের সাধারণ আকৃতি এবং ব্যাকটেরিয়ার বিন্যাস পর্যবেক্ষণের জন্য উপযুক্ত। বেসিক রঞ্জকগুলি সাধারণত সাধারণ দাগের জন্য ব্যবহৃত হয়। এর কারণ হল নিরপেক্ষ, ক্ষারীয় বা দুর্বল অম্লীয় দ্রবণে, ব্যাকটেরিয়া কোষগুলি সাধারণত নেতিবাচকভাবে চার্জ করা হয় এবং যখন মৌলিক রঞ্জকগুলি আয়নিত হয়, তখন তাদের অণুর রঞ্জক অংশ ইতিবাচকভাবে চার্জ হয়, তাই তারা ক্ষারীয়। ছোপানো অংশটি সহজেই ব্যাকটেরিয়ার সাথে মিলিত হয়ে তাদের রঙ করে। দাগযুক্ত ব্যাকটেরিয়া কোষগুলি ব্যাকগ্রাউন্ডের সাথে তীব্রভাবে বৈসাদৃশ্য করে, যা মাইক্রোস্কোপের নীচে তাদের সনাক্ত করা সহজ করে তোলে। সাধারণ রং করার জন্য সাধারণত ব্যবহৃত রঞ্জকগুলির মধ্যে রয়েছে মিথাইলিন ব্লু, ক্রিস্টাল ভায়োলেট, বেসিক ফুচসিন ইত্যাদি। যখন ব্যাকটেরিয়া শর্করাকে পচিয়ে অ্যাসিড তৈরি করে, ফলে সংস্কৃতি মাধ্যমের pH কমে যায়, তখন ব্যাকটেরিয়াতে ইতিবাচক চার্জ বৃদ্ধি পায়। এই সময়ে, অ্যাসিডিক রঞ্জক যেমন ইওসিন, অ্যাসিড ফুচসিন, বা কঙ্গো লাল দাগ দেওয়ার জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। ব্যাকটেরিয়া দাগ আগে ঠিক করা আবশ্যক. এর দুটি উদ্দেশ্য রয়েছে: একটি হল ব্যাকটেরিয়া মেরে ফেলা এবং তাদের কাচের স্লাইডে লেগে থাকা; অন্যটি হল রঞ্জকের প্রতি তাদের সখ্যতা বৃদ্ধি করা। দুটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত পদ্ধতি হল গরম এবং রাসায়নিক স্থিরকরণ। ফিক্সিং করার সময়, কোষের আসল আকৃতি বজায় রাখার চেষ্টা করুন।
3 উপকরণ
3.1 ব্যাকটেরিয়া: ব্যাসিলাস সাবটিলিস 12-18h নিউট্রিয়েন্ট আগার তির্যক কালচার, স্ট্যাফিলোকক্কাস অরিয়াস 24h পুষ্টির আগর তির্যক কালচার, Escherichia coli 24h নিউট্রিয়েন্ট আগর তির্যক কালচার, বেকারের খামির আগর তির্যক সংস্কৃতি।
3.2 ডাইং এজেন্ট: লু এর ক্ষারীয় মিথিলিন ব্লু ডাই (বা অ্যামোনিয়াম অক্সালেট ক্রিস্টাল ভায়োলেট ডাই), কার্বলিক অ্যাসিড ফুচসিন ডাই।
3.3 যন্ত্র বা অন্যান্য পাত্র: মাইক্রোস্কোপ, অ্যালকোহল ল্যাম্প, স্লাইড, ইনোকুলেশন লুপ, স্লাইড র্যাক, ডাবল-লেয়ার বোতল (সিডার তেল এবং জাইলিন রয়েছে), লেন্স টিস্যু, শারীরবৃত্তীয় স্যালাইন বা পাতিত জল ইত্যাদি।
4. প্রক্রিয়া: স্মিয়ার → শুকানো → ফিক্সেশন → স্টেনিং → ওয়াশিং → শুকানো → মাইক্রোস্কোপিক পরীক্ষা।
5 ধাপ
5.1 স্মিয়ার: দুটি পরিষ্কার এবং তেল-মুক্ত কাচের স্লাইড নিন। জীবাণুমুক্ত অবস্থায়, গ্লাস স্লাইডের প্রতিটি কেন্দ্রে সাধারণ স্যালাইনের (বা পাতিত জল) একটি ছোট ফোঁটা রাখুন। ব্যাসিলাস সাবটিলিস থেকে ব্যাকটেরিয়া জীবাণুমুক্ত করতে একটি ইনোকুলেশন লুপ ব্যবহার করুন। , Micrococcus luteus এবং Escherichia coli, তির্যক উপর জল ফোঁটা মধ্যে সামান্য ব্যাকটেরিয়া লন বাছাই, ভাল মিশ্রিত এবং একটি পাতলা ফিল্মে এটি প্রয়োগ করুন। আপনি যদি ব্যাকটেরিয়াল সাসপেনশন (বা লিকুইড কালচার) স্মিয়ার ব্যবহার করেন, তাহলে আপনি একটি ইনোকুলেটিং লুপ ব্যবহার করে 2 থেকে 3টি লুপ বাছাই করতে পারেন এবং সেগুলি সরাসরি স্লাইডে প্রয়োগ করতে পারেন। খুব বেশি শারীরবৃত্তীয় স্যালাইন (পাতিত জল) না ফেলে এবং ব্যাকটেরিয়া অপসারণের জন্য সতর্ক থাকুন এবং সমানভাবে প্রয়োগ করুন এবং খুব ঘন না।
5.2 ঘরের তাপমাত্রায় প্রাকৃতিকভাবে শুকানো। আপনি এটিকে শুকানোর জন্য প্রলিপ্ত দিকের দিকে মুখ করে অ্যালকোহল ল্যাম্পের উপর সামান্য গরম করতে পারেন। তবে শিখার খুব কাছাকাছি না যাওয়া নিশ্চিত করুন, কারণ খুব বেশি তাপমাত্রা ব্যাকটেরিয়ার রূপবিদ্যাকে ধ্বংস করবে।
5.3 ফিক্সেশন যদি উত্তপ্ত শুষ্ককরণ ব্যবহার করা হয়, ফিক্সেশন এবং শুকানো এক ধাপে একত্রিত হয়, এবং পদ্ধতিটি শুকানোর মতোই। স্মিয়ার, শুকনো এবং তাপ-ফিক্স।
5.4 স্টেনিং: স্লাইড র্যাকের উপর স্লাইডটি ফ্ল্যাট রাখুন এবং 1 থেকে 2 ফোঁটা ডাই দ্রবণটি স্মিয়ারের উপর যোগ করুন (এটি ডাই দ্রবণটির জন্য শুধুমাত্র স্মিয়ার ফিল্মটি ঢেকে রাখার জন্য উপযুক্ত)। 1 থেকে 2 মিনিটের জন্য লু এর মৌলিক মিথিলিন নীল দিয়ে দাগ দিন এবং কার্বলিক অ্যাসিড ফুচসিন (বা অ্যামোনিয়াম অক্সালেট ক্রিস্টাল ভায়োলেট) দিয়ে প্রায় 1 মিনিটের জন্য দাগ দিন।
5.5 জল দিয়ে ধোয়া: রঞ্জক দ্রবণটি ঢেলে দিন এবং স্লাইডের এক প্রান্ত থেকে কলের জল দিয়ে আলতো করে ধুয়ে ফেলুন যতক্ষণ না দাগ থেকে জল বর্ণহীন হয়৷ জল দিয়ে ধোয়ার সময়, প্রলেপযুক্ত পৃষ্ঠটি সরাসরি জল দিয়ে ধুয়ে ফেলবেন না। জলের প্রবাহ খুব দ্রুত বা খুব বড় হওয়া উচিত নয় যাতে স্মিয়ার ফিল্মটি পড়ে না যায়।
5.6 শুকানো: স্লাইডের জলের ফোঁটাগুলি ঝেড়ে ফেলুন এবং প্রাকৃতিকভাবে শুকিয়ে নিন, হেয়ার ড্রায়ার দিয়ে ব্লো ড্রাই করুন বা শোষক কাগজ দিয়ে শোষণ করুন (ব্যাকটেরিয়া মুছে ফেলার জন্য সতর্ক থাকুন)। 5.7 মাইক্রোস্কোপিক পরীক্ষা স্মিয়ার শুকানোর পরে, মাইক্রোস্কোপিক পরীক্ষা করুন। তেলের লেন্স দিয়ে দেখার আগে স্মিয়ারটি অবশ্যই সম্পূর্ণ শুষ্ক হতে হবে।
6 ফলাফল একক দাগের পরে পর্যবেক্ষণ করা E. coli এবং Micrococcus luteus-এর রূপবিদ্যা আঁকুন।
