স্টেনিং কৌশল এবং অণুজীবের মাইক্রোস্কোপিক পর্যবেক্ষণ
ব্যাকটেরিয়া সহজ স্টেনিং
1 উদ্দেশ্য
1.1 মাইক্রোবিয়াল স্মিয়ার এবং স্টেনিংয়ের প্রাথমিক কৌশলগুলি শিখতে।
1.2 ব্যাকটেরিয়া সহজ স্টেনিং পদ্ধতি আয়ত্ত করা.
1.3 ব্যাকটেরিয়ার অঙ্গসংস্থানগত বৈশিষ্ট্যগুলি জানতে এবং তেল আয়না এবং অ্যাসেপটিক অপারেশন কৌশলগুলির ব্যবহার শেখার একীভূত করা।
2 নীতি অণুজীববিদ্যা পরীক্ষায় ব্যাকটেরিয়া দাগ এবং দাগ একটি মৌলিক কৌশল। ব্যাকটেরিয়ার কোষগুলি ছোট এবং স্বচ্ছ, সাধারণ হালকা মাইক্রোস্কোপের নীচে এগুলি সনাক্ত করা সহজ নয় এবং সেগুলি অবশ্যই দাগযুক্ত। ব্যাকটেরিয়াকে দাগ দেওয়ার জন্য একটি একক রঞ্জক ব্যবহার, যাতে দাগযুক্ত জীব এবং পটভূমিতে একটি স্পষ্ট রঙের পার্থক্য তৈরি হয়, যাতে তাদের রূপবিদ্যা এবং গঠন আরও স্পষ্টভাবে পর্যবেক্ষণ করা যায়। এই পদ্ধতিটি সম্পাদন করা সহজ এবং জীবের সাধারণ আকৃতি এবং ব্যাকটেরিয়ার বিন্যাস পর্যবেক্ষণের জন্য উপযুক্ত। ক্ষারীয় রঞ্জকগুলি সাধারণত সাধারণ দাগের জন্য ব্যবহৃত হয়, কারণ নিরপেক্ষ, ক্ষারীয় বা দুর্বল অম্লীয় দ্রবণে, ব্যাকটেরিয়া কোষগুলি সাধারণত নেতিবাচকভাবে চার্জ করা হয় এবং যখন ক্ষারীয় রঞ্জকগুলি আয়নিত হয়, তখন তাদের অণুর দাগের অংশটি ইতিবাচকভাবে চার্জ করা হয়, তাই ক্ষারীয় রঞ্জকগুলির দাগযুক্ত অংশ ব্যাকটেরিয়া রঙিন করতে সহজে ব্যাকটেরিয়া আবদ্ধ করতে পারেন. দাগযুক্ত ব্যাকটেরিয়া কোষগুলি ব্যাকগ্রাউন্ডের সাথে তীব্রভাবে বৈসাদৃশ্য করে এবং মাইক্রোস্কোপের নীচে সনাক্ত করা সহজ। সাধারণ দাগের জন্য সাধারণত ব্যবহৃত রঞ্জকগুলির মধ্যে রয়েছে মেরোসায়ানাইন নীল, ক্রিস্টাল ভায়োলেট এবং মৌলিক যৌগ লাল। যখন ব্যাকটেরিয়া চিনির পচন ধরে অ্যাসিড তৈরি করে যাতে মাঝারিটির pH কমে যায়, ব্যাকটেরিয়ার ইতিবাচক চার্জ বৃদ্ধি পায় এবং তারপরে লাল, অম্লীয় লাল বা কঙ্গো লাল এবং অন্যান্য অ্যাসিডিক রঞ্জক দাগ ব্যবহার করা যেতে পারে। ব্যাকটেরিয়া দাগ আগে ঠিক করা আবশ্যক. এর উদ্দেশ্য দ্বিগুণ: একটি হল ব্যাকটেরিয়াকে মেরে ফেলা এবং ব্যাকটেরিয়াকে স্লাইডে লেগে থাকা; দ্বিতীয়টি হল রঞ্জকের প্রতি তার সখ্যতা বৃদ্ধি করা। দুটি পদ্ধতি সাধারণত ব্যবহৃত হয়: গরম এবং রাসায়নিক স্থিরকরণ। ফিক্সিং করার সময় কোষের মূল রূপবিদ্যা বজায় রাখার চেষ্টা করুন।
3 উপাদান
3.1 স্ট্রেন ব্যাসিলাস সাবটিলিস 12-18h পুষ্টির আগর তির্যক সংস্কৃতি, স্ট্যাফিলোকক্কাস অরিয়াস প্রায় 24 ঘন্টা পুষ্টির আগর তির্যক সংস্কৃতি, এসচেরিচিয়া কোলি 24 ঘন্টা পুষ্টির আগর তির্যক সংস্কৃতি, বেকারের খামির আগর তির্যক সংস্কৃতি।
3.2 স্টেন লু-এর ক্ষারীয় মিথিলিন নীল দাগ (বা অ্যামোনিয়াম অক্সালেট ক্রিস্টাল ভায়োলেট স্টেন), কার্বলিক অ্যাসিড যৌগিক লাল দাগ।
3.3 যন্ত্র বা অন্যান্য সরঞ্জাম মাইক্রোস্কোপ, অ্যালকোহল ল্যাম্প, স্লাইড, ইনোকুলেশন রিং, স্লাইড হোল্ডার, ডবল-লেয়ার বোতল (সিডার তেল এবং জাইলিন দিয়ে ভরা), মাইক্রোস্কোপ পেপার, ফিজিওলজিক্যাল স্যালাইন বা পাতিত জল, ইত্যাদি।
4 পদ্ধতি স্মিয়ার → শুকানো → ফিক্সেশন → স্টেনিং → ওয়াশিং → শুকানো → মাইক্রোস্কোপিক পরীক্ষা।
5 ধাপ
5.1 স্মিয়ার ব্যাসিলাস সাবটিলিস, গারসিনিয়া মাইক্রোকোকাস থেকে যথাক্রমে অ্যাসেপ্টিকভাবে কাজ করার জন্য একটি ইনোকুলেটিং রিং সহ অ্যাসেপটিক অবস্থায় স্লাইডের কেন্দ্রে একটি ছোট ফোঁটা স্যালাইন (বা পাতিত জল) সহ দুটি পরিষ্কার এবং তেল-মুক্ত স্লাইড নিন। এবং Escherichia coli তির্যক জলের ফোঁটা থেকে একটি সামান্য শ্যাওলা বাছাই, মিশ্রিত এবং একটি ফিল্ম সঙ্গে প্রলিপ্ত. ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশন (বা তরল কালচার) স্মিয়ার হলে, রিং পিক 2 থেকে 3টি রিং সরাসরি স্লাইডে টিকা দিতে ব্যবহার করা যেতে পারে। খেয়াল রাখবেন স্যালাইন (পাসিত পানি) এবং ব্যাকটেরিয়া যেন বেশি না হয় এবং সমানভাবে ছড়িয়ে পড়ে, খুব বেশি ঘন না হয়।
5.2 ঘরের তাপমাত্রায় প্রাকৃতিকভাবে শুকানো। এটি একটি অ্যালকোহল ল্যাম্পের উপরে প্রলিপ্ত পাশ দিয়ে কিছুটা উপরে গরম করেও শুকানো যেতে পারে। যাইহোক, শিখার খুব কাছে যাবেন না, কারণ তাপমাত্রা খুব বেশি হলে তা ব্যাকটেরিয়ার রূপবিদ্যাকে ধ্বংস করবে।
5.3 ফিক্সেশন যদি তাপ শুষ্ককরণ ব্যবহার করা হয়, শুষ্ককরণের মতো একইভাবে ফিক্সেশন এবং শুষ্ককরণ একক ধাপে একত্রিত হয়। স্মিয়ার, শুকনো এবং তাপ ফিক্স।
5.4 স্টেনিং স্লাইডটি স্লাইডের শেল্ফের উপর ফ্ল্যাট রাখুন, 1 থেকে 2 ফোঁটা স্টেনিং দ্রবণ স্মিয়ারে যোগ করুন (স্টেইনিং দ্রবণটি কেবল স্মিয়ার ফিল্মটিকে ঢেকে রাখে)। Lü এর বেসিক মেলনক্স ব্লু দিয়ে 1~2 মিনিটের জন্য এবং কার্বনেট রেড (বা অ্যামোনিয়াম অক্সালেট ক্রিস্টাল ভায়োলেট) দিয়ে প্রায় 1 মিনিটের জন্য দাগ দিন।
5.5 রিন্সিং স্টেনিং দ্রবণটি ঢেলে দিন এবং স্লাইডের এক প্রান্ত থেকে আলতো করে কলের জল দিয়ে ধুয়ে ফেলুন যতক্ষণ না স্মিয়ার থেকে নেমে আসা জল বর্ণহীন হয়৷ ধুয়ে ফেলার সময়, প্রলেপযুক্ত পৃষ্ঠটি ধোয়ার জন্য সরাসরি জল প্রবাহিত হতে দেবেন না। স্মিয়ার ফিল্মটি অপসারণ এড়াতে জলের প্রবাহ খুব দ্রুত বা খুব বড় হওয়া উচিত নয়।
5.6 শুকানো প্রাকৃতিকভাবে শুকানোর জন্য স্লাইডের জলের ফোঁটাগুলিকে ঝেড়ে ফেলুন, শুকনো শুষে নিতে ব্লো ড্রাই বা শোষক কাগজ ব্যবহার করা যেতে পারে (ব্যাকটেরিয়া শরীরকে মুছে ফেলার জন্য সতর্ক থাকুন)। 5.7 মাইক্রোস্কোপিক পরীক্ষা স্মিয়ার শুকানো হয় এবং মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পরীক্ষা করা হয়। তেল মাইক্রোস্কোপ দিয়ে পর্যবেক্ষণ করার আগে স্মিয়ারটি অবশ্যই সম্পূর্ণ শুষ্ক হতে হবে।
6 ফলাফল একক দাগের পরে E. coli এবং Micrococcus garciniae-এর রূপবিদ্যা আঁকুন।
গ্রাম দাগ
1। উদ্দেশ্য
1.1 গ্রাম দাগের নীতি এবং ব্যাকটেরিয়া শ্রেণীবিভাগ এবং সনাক্তকরণে এর গুরুত্ব বোঝা।
1.2 গ্রাম স্টেনিং কৌশল শিখতে এবং আয়ত্ত করতে এবং হালকা অণুবীক্ষণ যন্ত্রের তেল লেন্স ব্যবহারের শিক্ষাকে একীভূত করতে।
