ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপি ব্যবহারে বেশ কিছু সমস্যা:
(1) ফেজ রিভার্সাল যখন n'
(2) ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপির ইমেজিং প্রক্রিয়ায় হ্যালো এবং ধীরে ধীরে ম্লান হওয়ার প্রভাব, যখন ফেজ বিলম্বের কারণে একটি কাঠামো গাঢ় হয়ে যায়, এটি আলোর ক্ষতি নয়, কিন্তু চিত্র সমতলে আলোর পুনর্বণ্টনের ফলে। অতএব, অন্ধকার অঞ্চলে স্পষ্টভাবে অদৃশ্য হয়ে যাওয়া আলো অন্ধকার বস্তুর চারপাশে একটি উজ্জ্বল আলোকচ্ছটা হিসাবে প্রদর্শিত হবে। এটি ফেজ কনট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপির একটি অসুবিধা, যা সূক্ষ্ম কাঠামোর পর্যবেক্ষণে বাধা দেয়। যখন কণাকার ছিদ্রটি খুব সংকীর্ণ হয়, তখন হ্যালো ঘটনাটি আরও গুরুতর হয়। ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপির আরেকটি ঘটনা হল ডিমিং এফেক্ট, যা ফেজ কন্ট্রাস্ট পর্যবেক্ষণের সময় পরিলক্ষিত একই ফেজ বিলম্বের সাথে একটি বৃহত্তর এলাকার প্রান্তে বৈসাদৃশ্য হ্রাসকে বোঝায়।
(3) নমুনার বেধের প্রভাব পার্থক্য পর্যবেক্ষণ করার সময়, নমুনার বেধ 5 μm বা পাতলা হওয়া উচিত। মোটা নমুনা ব্যবহার করার সময়, নমুনার উপরের স্তরটি পরিষ্কার, যখন গভীর স্তরটি ঝাপসা হবে এবং ফেজ শিফট হস্তক্ষেপ এবং আলো বিচ্ছুরণ হস্তক্ষেপ তৈরি করবে।
(4) নমুনার উপর কভার গ্লাস এবং স্লাইডের প্রভাব অবশ্যই একটি কভার গ্লাস দিয়ে ঢেকে রাখতে হবে, অন্যথায় অ্যানুলার অ্যাপারচারের উজ্জ্বল রিং এবং ফেজ প্লেটের গাঢ় রিং ওভারল্যাপ করা কঠিন। স্লাইড এবং কভার গ্লাসের কাচের গুণমানের জন্যও ডিফারেনশিয়াল পর্যবেক্ষণের উচ্চ প্রয়োজনীয়তা রয়েছে। যখন স্ক্র্যাচ, অসম বেধ, বা অসম অসমতা থাকে, এটি উজ্জ্বল রিং এবং ফেজ হস্তক্ষেপের বিকৃতি ঘটাতে পারে। উপরন্তু, যদি কাচের স্লাইড খুব পুরু বা খুব পাতলা হয়, তাহলে এটি অ্যানুলার অ্যাপারচার বড় বা ছোট হয়ে যাবে।
বর্তমানে, অপটিক্যাল অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি ঐতিহ্যগত জৈবিক অণুবীক্ষণ যন্ত্র থেকে বিভিন্ন ধরণের বিশেষ অণুবীক্ষণ যন্ত্রে বিবর্তিত হয়েছে। তাদের ইমেজিং নীতি অনুযায়ী, তারা বিভক্ত করা যেতে পারে:
① জ্যামিতিক অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ: জৈবিক অণুবীক্ষণ যন্ত্র, পতিত আলো মাইক্রোস্কোপ, ইনভার্টেড মাইক্রোস্কোপ, মেটালোগ্রাফিক মাইক্রোস্কোপ, ডার্ক ফিল্ড মাইক্রোস্কোপ ইত্যাদি সহ।
② ফিজিক্যাল অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ: ফেজ কনট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপ, পোলারাইজেশন মাইক্রোস্কোপ, ইন্টারফারেন্স মাইক্রোস্কোপ, ফেজ কনট্রাস্ট মেরুকরণ মাইক্রোস্কোপ, ফেজ কনট্রাস্ট ইন্টারফারেন্স মাইক্রোস্কোপ, ফেজ কনট্রাস্ট ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ইত্যাদি।
③ তথ্য রূপান্তর মাইক্রোস্কোপ: ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ, মাইক্রোস্পেকট্রোমিটার, চিত্র বিশ্লেষণ মাইক্রোস্কোপ, অ্যাকোস্টিক মাইক্রোস্কোপ, ফটোগ্রাফিক মাইক্রোস্কোপ, টেলিভিশন মাইক্রোস্কোপ ইত্যাদি।
অণুবীক্ষণ যন্ত্রের বেশ কয়েকটি ব্যবহার তালিকাভুক্ত করুন: একটি জৈবিক অণুবীক্ষণ যন্ত্র: সাধারণভাবে বলতে গেলে, অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলিকে স্টেরিও মাইক্রোস্কোপ এবং জৈবিক অণুবীক্ষণ যন্ত্রে ভাগ করা যায়। বিভিন্ন উদ্দেশ্য এবং প্রয়োজনীয়তার কারণে, অনেক শাখার উদ্ভব হয়েছে, কিন্তু মূল নীতিগুলি একই রয়ে গেছে। পোলারাইজেশন, ফেজ কনট্রাস্ট, ট্রান্সমিশন এবং পতনশীল আলো এখনও জৈবিক মাইক্রোস্কোপ হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়। স্টেরিওস্কোপিক মাইক্রোস্কোপ, যা শারীরবৃত্তীয় মাইক্রোস্কোপ, কঠিন মাইক্রোস্কোপ এবং স্টেরিও মাইক্রোস্কোপ নামেও পরিচিত, এটি একটি বহুমুখী মাইক্রোস্কোপ। এটি পরিচালনা করা সহজ, নমুনাগুলির জন্য কম প্রয়োজনীয়তা রয়েছে, একটি দীর্ঘ কাজের দূরত্ব রয়েছে এবং পর্যবেক্ষণ করার সময় ত্রিমাত্রিকতার একটি শক্তিশালী অনুভূতি রয়েছে। এটি ভৌত বস্তু পর্যবেক্ষণ করতে বা পর্যবেক্ষণ করার সময় নমুনাগুলিতে কিছু অপারেশন করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। জৈবিক অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মতো নমুনাকে টুকরো টুকরো করার পরিবর্তে, স্লাইসিংয়ের জন্য সংশ্লিষ্ট প্রযুক্তি এবং সরঞ্জাম প্রয়োজন। অতএব, স্টেরিও মাইক্রোস্কোপগুলি মাইক্রোইলেক্ট্রনিক্স, নির্ভুল যন্ত্র সমাবেশ এবং রক্ষণাবেক্ষণ এবং মাইক্রো এনগ্রেভিং এর মতো ক্ষেত্রে বিস্তৃত অ্যাপ্লিকেশন রয়েছে। জীববিজ্ঞান এবং ওষুধের ক্ষেত্রে অ্যানাটমি এবং মাইক্রোসার্জারিতে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় (বর্তমানে সার্জিক্যাল মাইক্রোস্কোপ হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ), জীববিজ্ঞান এবং ওষুধে ব্যবহৃত আলোর উত্স শুধুমাত্র একটি ঠান্ডা আলোর উত্স হতে পারে (ফাইবার অপটিক); ছোট অংশ এবং সমন্বিত সার্কিটগুলির পর্যবেক্ষণ, সমাবেশ, পরিদর্শন এবং অন্যান্য কাজের জন্য শিল্পে ব্যবহৃত হয়। মেটালোগ্রাফিক অণুবীক্ষণ যন্ত্র: অনেকে এটিকে "মেটালোগ্রাফিক মাইক্রোস্কোপ" হিসাবে লিখতে পছন্দ করেন। মেটালোগ্রাফিক মাইক্রোস্কোপ হল একটি অণুবীক্ষণ যন্ত্র যা বিশেষভাবে ধাতু এবং খনিজ পদার্থের মতো অস্বচ্ছ বস্তুর ধাতব কাঠামো পর্যবেক্ষণ করতে ব্যবহৃত হয়। এই অস্বচ্ছ বস্তুগুলি একটি নিয়মিত সংক্রমণ মাইক্রোস্কোপে পর্যবেক্ষণ করা যায় না, তাই তাদের এবং একটি নিয়মিত অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মধ্যে প্রধান পার্থক্য হল যে আগেরটি প্রতিফলিত আলো ব্যবহার করে, যখন পরেরটি আলোকসজ্জার জন্য প্রেরিত আলো ব্যবহার করে। একটি মেটালোগ্রাফিক মাইক্রোস্কোপে, আলোকসজ্জা রশ্মিকে উদ্দেশ্যমূলক লেন্স থেকে পর্যবেক্ষণ করা বস্তুর পৃষ্ঠের দিকে নির্দেশ করা হয়, পৃষ্ঠ দ্বারা প্রতিফলিত হয় এবং তারপর ইমেজিংয়ের জন্য উদ্দেশ্যমূলক লেন্সে ফিরে আসে। এই প্রতিফলিত আলো পদ্ধতিটি ইন্টিগ্রেটেড সার্কিট সিলিকন ওয়েফার সনাক্তকরণেও ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।
