ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের নীতি ও নির্মাণ
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ একটি উচ্চ উজ্জ্বল দক্ষতা বিন্দু আলোর উত্স ব্যবহার করে, যা উত্তেজনা আলো হিসাবে একটি রঙ ফিল্টারিং সিস্টেমের মাধ্যমে একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলো (যেমন অতিবেগুনী আলো 3650 ইঞ্চি বা বেগুনি নীল আলো 4200 ইঞ্চি) নির্গত করে এবং নমুনায় ফ্লুরোসেন্ট পদার্থগুলিকে উত্তেজিত করে। ফ্লুরোসেন্স বিভিন্ন রং নির্গত. এর পরে, এটি উদ্দেশ্য এবং আইপিসের বিবর্ধনের মাধ্যমে পর্যবেক্ষণ করা হয়। এইভাবে, এমনকি দুর্বল ফ্লুরোসেন্সের সাথেও, এটি শক্তিশালী বিপরীত পটভূমিতে সহজেই স্বীকৃত এবং অত্যন্ত সংবেদনশীল, প্রধানত কোষের গঠন এবং কার্যকারিতা, সেইসাথে রাসায়নিক গঠন অধ্যয়নের জন্য ব্যবহৃত হয়। একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের মৌলিক কাঠামো একটি সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ এবং কিছু আনুষাঙ্গিক (যেমন একটি ফ্লুরোসেন্ট আলোর উত্স, উত্তেজনা ফিল্টার, বিক্রোম্যাটিক বিম বিভাজক, এবং ব্লকিং ফিল্টার ইত্যাদি) দিয়ে গঠিত। ফ্লুরোসেন্ট আলোর উত্স - সাধারণত অতি-উচ্চ চাপের পারদ বাতি ব্যবহার করে (50-200W), যা বিভিন্ন তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলো নির্গত করতে পারে। যাইহোক, প্রতিটি ফ্লুরোসেন্ট পদার্থের একটি উত্তেজনা আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্য থাকে যা সবচেয়ে শক্তিশালী ফ্লুরোসেন্স তৈরি করে, তাই উত্তেজনা ফিল্টারগুলি (সাধারণত অতিবেগুনি, বেগুনি, নীল এবং সবুজ উত্তেজনা ফিল্টার) যোগ করা প্রয়োজন যাতে উত্তেজনা আলোর শুধুমাত্র একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্য অতিক্রম করে এবং আলোকিত হয়। নমুনা, অন্যান্য সমস্ত আলো শোষণ করার সময়। উত্তেজিত আলো দ্বারা বিকিরিত হওয়ার পরে, প্রতিটি পদার্থ খুব অল্প সময়ের মধ্যে বিকিরণের চেয়ে দীর্ঘতর তরঙ্গদৈর্ঘ্য সহ দৃশ্যমান প্রতিপ্রভ নির্গত করে। ফ্লুরোসেন্সের নির্দিষ্টতা রয়েছে এবং এটি উত্তেজনা আলোর চেয়ে সাধারণত দুর্বল। নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্স পর্যবেক্ষণ করার জন্য, অবজেক্টিভ লেন্সের পিছনে একটি ব্লকিং (বা দমনকারী) ফিল্টার যোগ করতে হবে। এর দুটি ফাংশন রয়েছে: প্রথমত, এটি উত্তেজনার আলোকে আইপিসে প্রবেশ করা থেকে বাধা দেয় এবং ফ্লুরোসেন্সকে বিরক্ত না করে এবং চোখের ক্ষতি না করে; দ্বিতীয়ত, এটি একটি নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্স রঙ প্রদর্শন করে নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্স নির্বাচন করে এবং এর মধ্য দিয়ে যাওয়ার অনুমতি দেয়। উভয় ধরনের ফিল্টার একসাথে ব্যবহারের জন্য নির্বাচন করতে হবে।
তাদের অপটিক্যাল পাথের উপর ভিত্তি করে দুটি ধরণের ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ রয়েছে:
1. ট্রান্সমিশন ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ: উত্তেজনা আলোর উত্স নমুনা উপাদানের মাধ্যমে একটি কনডেন্সারের মাধ্যমে ফ্লুরোসেন্সকে উত্তেজিত করার জন্য প্রেরণ করা হয়। সাধারণত ব্যবহৃত অন্ধকার ক্ষেত্রের আলো সংগ্রাহক, বা সাধারণ আলো সংগ্রাহক, উত্তেজনা আলো এবং পার্শ্ব আলোকে নমুনায় রূপান্তর করতে প্রতিফলককে সামঞ্জস্য করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। এটি একটি অপেক্ষাকৃত পুরানো ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ। এর সুবিধা হল ফ্লুরোসেন্স কম ম্যাগনিফিকেশনে শক্তিশালী, অন্যদিকে এর অসুবিধা হল যে ম্যাগনিফিকেশন বাড়লে ফ্লুরোসেন্স দুর্বল হয়ে যায়। অতএব, বৃহত্তর নমুনা উপকরণ পর্যবেক্ষণের জন্য এটি ভাল।
2. ফলিং বিম ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এটি আধুনিক সময়ে বিকশিত একটি নতুন ধরনের ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ। আগেরটির থেকে ভিন্ন, উত্তেজনা আলো বস্তুনিষ্ঠ লেন্স থেকে নমুনার পৃষ্ঠে নিচে পড়ে, একই উদ্দেশ্যমূলক লেন্স ব্যবহার করে ইলুমিনেশন কনডেনসার এবং ফ্লুরোসেন্স সংগ্রহের জন্য উদ্দেশ্যমূলক লেন্স ব্যবহার করে। একটি দ্বৈত রঙের মরীচি বিভাজক অপটিক্যাল পাথে যোগ করতে হবে, যা হালকা ইউরেনিয়ামের 45 ডিগ্রি কোণে রয়েছে। উত্তেজনা আলো বস্তুনিষ্ঠ লেন্সে প্রতিফলিত হয় এবং নমুনার উপর কেন্দ্রীভূত হয়। নমুনা দ্বারা উত্পন্ন ফ্লুরোসেন্স, সেইসাথে অবজেক্টিভ লেন্স এবং কভার গ্লাসের পৃষ্ঠ থেকে প্রতিফলিত উত্তেজনা আলো, একই সাথে উদ্দেশ্য লেন্সে প্রবেশ করে এবং উত্তেজনা এবং ফ্লুরোসেন্সকে আলাদা করে ডাইক্রোয়িক বিম বিভাজকের কাছে ফিরে আসে। অবশিষ্ট উত্তেজনা তারপর ব্লকিং ফিল্টার দ্বারা শোষিত হয়। যদি বিভিন্ন উত্তেজনা ফিল্টার/দ্বৈত রঙের মরীচি বিভাজক/ব্লকিং ফিল্টার সংমিশ্রণ ব্যবহার করা হয়, তাহলে তারা বিভিন্ন ফ্লুরোসেন্ট প্রতিক্রিয়া পণ্যের চাহিদা মেটাতে পারে। এই ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপের সুবিধা হল দৃষ্টির আলোকসজ্জার ক্ষেত্রটি অভিন্ন, ইমেজিং পরিষ্কার এবং বৃহত্তর বিবর্ধন, ফ্লুরোসেন্স তত শক্তিশালী।
