ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির ভূমিকা
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি হল স্বল্প-তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলো দিয়ে ফ্লুরোসসিন দিয়ে দাগযুক্ত বস্তুকে বিকিরণ করা, যাতে এটি দীর্ঘ-তরঙ্গদৈর্ঘ্য ফ্লুরোসেন্স তৈরি করতে উত্তেজিত হয় এবং তারপর পর্যবেক্ষণ করা হয়। একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপে, একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের উত্তেজনা আলোকে ফ্লুরোসেন্স তৈরি করতে নমুনার আলোকসজ্জা থেকে নির্বাচন করতে হবে এবং তারপরে পর্যবেক্ষণের জন্য উত্তেজনা আলো এবং প্রতিপ্রভের মিশ্র আলো থেকে ফ্লুরোসেন্সকে আলাদা করতে হবে। অতএব, ফিল্টার সিস্টেম একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্য নির্বাচন করতে একটি অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলি জীববিজ্ঞান, ওষুধ এবং অন্যান্য ক্ষেত্রে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।
1. ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের প্রধান উপাদান:
(ক) আলোর উৎস: আলোর উৎস বিভিন্ন তরঙ্গদৈর্ঘ্যের (আল্ট্রাভায়োলেট থেকে ইনফ্রারেড পর্যন্ত) আলো বিকিরণ করে। দ্য
(B) উত্তেজনা ফিল্টার আলোর উত্স: একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলোর মাধ্যমে যা নমুনাটি ফ্লুরোসেন্স তৈরি করতে পারে, যখন আলোকে ব্লক করে যা উত্তেজনাপূর্ণ প্রতিপ্রভের জন্য অকেজো। দ্য
(C) ফ্লুরোসেন্ট নমুনা: সাধারণত ফ্লুরোসেন্ট রঙ্গক দিয়ে দাগযুক্ত। দ্য
(D) ব্লকিং ফিল্টার: উত্তেজনা আলোকে ব্লক করুন যা নমুনা দ্বারা শোষিত হয় না এবং নির্বাচিতভাবে প্রতিপ্রভা প্রেরণ করে এবং কিছু তরঙ্গদৈর্ঘ্য নির্বাচনীভাবে প্রতিপ্রভাতে প্রেরণ করা হয়।
দ্য
2. ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের শ্রেণীবিভাগ:
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলি সাধারণত দুই প্রকারে বিভক্ত: ট্রান্সমিশন এবং এপি-ইমিশন:
ক ট্রান্সমিশনের ধরন: উত্তেজনা আলোটি পরিদর্শন করার জন্য বস্তুর নিচ থেকে আসে এবং কনডেন্সারটি একটি অন্ধকার ক্ষেত্রের কনডেন্সার, যাতে উত্তেজনা আলো উদ্দেশ্যমূলক লেন্সে প্রবেশ না করে, তবে প্রতিপ্রভ বস্তু উদ্দেশ্য লেন্সে প্রবেশ করে। এটি কম ম্যাগনিফিকেশনে উজ্জ্বল, কিন্তু উচ্চ ম্যাগনিফিকেশনে গাঢ়। তেল নিমজ্জন এবং কেন্দ্রে কাজ করা কঠিন। কম ম্যাগনিফিকেশনে আলোর পরিসর নির্ধারণ করা বিশেষত কঠিন, তবে এটি দৃশ্যের পটভূমির একটি খুব অন্ধকার ক্ষেত্র পেতে পারে। ট্রান্সমিশন টাইপ অ-স্বচ্ছ বস্তুর জন্য ব্যবহার করা হয় না। দ্য
খ. এপি-টাইপ: ট্রান্সমিশন টাইপ বর্তমানে প্রায় বিলুপ্ত হয়ে গেছে। নতুন ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলির বেশিরভাগই এপি-টাইপ। আলোর উত্সটি পরিদর্শনের জন্য বস্তুর উপরে থেকে আসে এবং অপটিক্যাল পথে একটি বিম স্প্লিটার রয়েছে, তাই এটি স্বচ্ছ এবং অস্বচ্ছ উভয় বস্তুর পরিদর্শনের জন্য উপযুক্ত। যেহেতু অবজেক্টিভ লেন্স একটি কনডেন্সার লেন্স হিসেবে কাজ করে, তাই এটি শুধুমাত্র কাজ করা সহজ নয়, বরং কম ম্যাগনিফিকেশন থেকে হাই ম্যাগনিফিকেশন পর্যন্ত পুরো দৃশ্যের ক্ষেত্রের অভিন্ন আলোকসজ্জাও অর্জন করতে পারে। দ্য
দ্য
3. ফ্লুরোস্কোপির জন্য সতর্কতা
ক উত্তেজনা আলোর দীর্ঘমেয়াদী বিকিরণ ফ্লুরোসেন্স অ্যাটেন্যুয়েশন এবং নিভে যাওয়ার কারণ হবে, তাই পর্যবেক্ষণের সময় যতটা সম্ভব ছোট করুন এবং অস্থায়ীভাবে পর্যবেক্ষণ না করার সময় উত্তেজনা আলোকে ঢেকে রাখার জন্য একটি ব্যাফেল ব্যবহার করুন। দ্য
খ. তেল নিমজ্জন লেন্স দিয়ে পর্যবেক্ষণ করার সময়, "নন-ফ্লুরোসেন্ট তেল" ব্যবহার করুন। দ্য
গ. ফ্লুরোসেন্স প্রায় সবসময় দুর্বল এবং একটি অন্ধকার রুমে বাহিত করা উচিত। দ্য
d পাওয়ার সাপ্লাইতে একটি ভোল্টেজ স্টেবিলাইজার ইনস্টল করা সর্বোত্তম, অন্যথায় অস্থির ভোল্টেজটি কেবল পারদ বাতির জীবনকে হ্রাস করবে না, তবে মাইক্রোস্কোপ পরিদর্শনের প্রভাবকেও প্রভাবিত করবে। দ্য
দ্য
4. ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার
1. ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের নমুনার জন্য প্রস্তুতির প্রয়োজনীয়তা
ক কাচের স্লাইড
গ্লাস স্লাইডের পুরুত্ব 0.8 এবং 1.2 মিমি এর মধ্যে হওয়া উচিত। খুব পুরু একটি স্লাইড একদিকে আরও আলো শোষণ করবে, এবং অন্যদিকে, উত্তেজনা আলো নমুনার উপর কেন্দ্রীভূত হতে পারে না। স্লাইডগুলি অবশ্যই মসৃণ, বেধে অভিন্ন এবং সুস্পষ্ট অটোফ্লোরেসেন্স থেকে মুক্ত হতে হবে। কখনও কখনও কোয়ার্টজ গ্লাস স্লাইড ব্যবহার করা হয়। দ্য
খ. কাচের আবরণ
কভার গ্লাসের বেধ প্রায় 0.17 মিমি, মসৃণ। উত্তেজনা আলোকে শক্তিশালী করার জন্য, একটি শুষ্ক কভার গ্লাসও ব্যবহার করা যেতে পারে, যা একটি বিশেষ কভার গ্লাস যা বিভিন্ন স্তরের পদার্থ (যেমন ম্যাগনেসিয়াম ফ্লোরাইড) দিয়ে লেপা যা বিভিন্ন তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলোতে বিভিন্ন হস্তক্ষেপের প্রভাব ফেলে, যা তরঙ্গদৈর্ঘ্য তৈরি করতে পারে। ফ্লুরোসেন্স মসৃণভাবে যান। উত্তেজনা আলোর মধ্য দিয়ে যায়, এবং প্রতিফলিত উত্তেজনা আলো নমুনাকে উত্তেজিত করে। দ্য
গ. নমুনা
টিস্যু স্লাইস বা অন্যান্য নমুনা খুব ঘন হওয়া উচিত নয়। যদি এটি খুব পুরু হয়, তবে বেশিরভাগ উত্তেজনা আলো নমুনার নীচের অংশে গ্রাস করা হবে, যখন উদ্দেশ্যমূলক লেন্স দ্বারা সরাসরি পর্যবেক্ষণ করা উপরের অংশটি পুরোপুরি উত্তেজিত হতে পারে না। উপরন্তু, কোষ ওভারল্যাপ বা অমেধ্য ঢেকে রাখে, বিচারকে প্রভাবিত করে। দ্য
d মাউন্টিং এজেন্ট
গ্লিসারিন সাধারণত একটি মাউন্টিং এজেন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয়, যার কোনো অটোফ্লুরেসেন্স, বর্ণহীন এবং স্বচ্ছ হওয়া উচিত নয় এবং ফ্লুরোসেন্সের উজ্জ্বলতা pH 8-এ উজ্জ্বল হয়৷{1}}.5, এবং এটি দ্রুত বিবর্ণ হওয়া সহজ নয়৷ অতএব, গ্লিসারল এবং 0.5mol/L কার্বনেট বাফার দ্রবণের একটি সমান মিশ্রণ যার pH 9।{6}} থেকে 9.5 সাধারণত মাউন্টিং এজেন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয়। দ্য
e আয়না তেল
সাধারণত, ডার্ক-ফিল্ড ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং তেল নিমজ্জন নিমজ্জন উদ্দেশ্যগুলির সাথে নমুনাগুলি পর্যবেক্ষণ করার সময় নিমজ্জন তেল অবশ্যই ব্যবহার করা উচিত। বিশেষ নন-ফ্লুরোসেন্ট মিরর তেল ব্যবহার করা ভাল, যা উপরে উল্লিখিত গ্লিসারিন দ্বারা প্রতিস্থাপিত হতে পারে এবং তরল প্যারাফিনও ব্যবহার করা যেতে পারে, তবে প্রতিসরাঙ্ক সূচক কম, যা চিত্রের গুণমানকে কিছুটা প্রভাবিত করে।
