অণুবীক্ষণ যন্ত্রের নিচে অণুজীব কোষের রূপবিদ্যা কীভাবে পর্যবেক্ষণ করা হয়?

অণুবীক্ষণ যন্ত্রের নিচে অণুজীব কোষের রূপবিদ্যা কীভাবে পর্যবেক্ষণ করা হয়?

অণুবীক্ষণ যন্ত্রের উদ্ভাবন করা হয়েছিল হাসিমুখের বস্তু দেখার জন্য যা খালি চোখে দেখা যায় না। অণুজীবগুলি খুব ছোট, তাই তাদের অবশ্যই একটি মাইক্রোস্কোপের সাহায্যে বড় করা এবং পর্যবেক্ষণ করা উচিত। উপরন্তু, অনেক ধরনের অণুজীব আছে, তাই মূলত অধিকাংশ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ অণুজীব পর্যবেক্ষণ করতে পারে। পরের প্রশ্ন হল কী ধরনের অণুজীব পর্যবেক্ষণ ও বিশ্লেষণের জন্য কী ধরনের মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করা উচিত। অণুজীব আকারবিদ্যা পর্যবেক্ষণ করতে ব্যবহৃত সাধারণ অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলির মধ্যে রয়েছে জৈবিক অণুবীক্ষণ যন্ত্র, ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপ, ইনভার্টেড মাইক্রোস্কোপ, ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ, কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ ইত্যাদি।

নিম্নলিখিত অণুজীব পর্যবেক্ষণ করতে ব্যবহৃত বিভিন্ন মাইক্রোস্কোপ বর্ণনা করে:

1. সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ প্রাকৃতিক আলো বা আলোকে আলোর উৎস হিসেবে ব্যবহার করে এবং এর তরঙ্গদৈর্ঘ্য প্রায় 0.4 μm। অণুবীক্ষণ যন্ত্রের রেজোলিউশন হল তরঙ্গদৈর্ঘ্যের অর্ধেক, অর্থাৎ, 0.2 μm, এবং খালি চোখে দৃশ্যমান ক্ষুদ্রতম চিত্রটি হল 0.2 মিমি। অতএব, 1000 বার বড় করার জন্য একটি তেল (নিমজ্জন) আয়না ব্যবহার করে খালি চোখে দৃশ্যমান 0.2μm কণাগুলিকে 0.2mm এ বড় করতে পারে। ব্যাকটেরিয়া, অ্যাক্টিনোমাইসেট এবং ছত্রাক পর্যবেক্ষণের জন্য সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করা যেতে পারে।

2. ডার্কফিল্ড মাইক্রোস্কোপি সাধারণত দাগহীন মাইক্রোবিয়াল অঙ্গসংস্থান এবং গতিবিধি পর্যবেক্ষণ করতে ব্যবহৃত হয়। সাধারণ অণুবীক্ষণ যন্ত্রে ডার্ক ফিল্ড কনডেন্সার ইনস্টল করার পরে, আলো সরাসরি মাঝখান থেকে প্রবেশ করতে পারে না এবং দেখার ক্ষেত্রটি অন্ধকার। যখন নমুনাটি কনডেনসারের প্রান্ত থেকে তির্যক আলো পায়, তখন এটি ছড়িয়ে ছিটিয়ে যেতে পারে, তাই অন্ধকার ক্ষেত্রের পটভূমিতে ব্যাকটেরিয়া বা স্পিরোচেটের মতো উজ্জ্বল অণুজীব লক্ষ্য করা যায়।

3. ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপ ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপ ফেজ ডিফারেন্স প্লেটের হালকা প্রভাব ব্যবহার করে সরাসরি আলোর আলোর ফেজ এবং প্রশস্ততা পরিবর্তন করে এবং আলোর তীব্রতার পার্থক্যে আলো ফেজের পার্থক্যকে রূপান্তর করে। একটি ফেজ-কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপের অধীনে, যখন আলো একটি দাগহীন নমুনার মধ্য দিয়ে যায়, তখন আলোক পর্যায়ের পার্থক্যটি নমুনার বিভিন্ন অংশের ঘনত্বের অসামঞ্জস্যতার কারণে ঘটে এবং অণুজীবের আকারবিদ্যা, অভ্যন্তরীণ গঠন এবং গতিবিধি লক্ষ্য করা যায়।

4. ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ মূলত সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের মতই, প্রধান পার্থক্য হল আলোর উৎস, ফিল্টার এবং কনডেনসার। বর্তমানে, তাদের বেশিরভাগই এপি-লাইট ডিভাইস ব্যবহার করে এবং উচ্চ-চাপের পারদ বাতিগুলি সাধারণত আলোর উত্স হিসাবে ব্যবহৃত হয়, যা অতিবেগুনি বা নীল-বেগুনি আলো নির্গত করতে পারে। দুটি ধরণের ফিল্টার রয়েছে: উত্তেজনা ফিল্টার এবং শোষণ ফিল্টার। সাধারণ উজ্জ্বল-ক্ষেত্র কনডেন্সার ছাড়াও, অন্ধকার-ক্ষেত্রের কনডেন্সারগুলি ফ্লুরোসেন্স এবং ব্যাকগ্রাউন্ডের মধ্যে বৈপরীত্য বাড়ানোর জন্য নীল আলো ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপেও ব্যবহার করা যেতে পারে। এই পদ্ধতিটি ফ্লুরোসেন্ট পিগমেন্টের সাথে দাগযুক্ত বা ফ্লুরোসেন্ট অ্যান্টিবডিগুলির সাথে মিলিত ব্যাকটেরিয়া সনাক্তকরণ বা সনাক্তকরণের জন্য প্রযোজ্য।

5. ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপগুলি আলোর উত্স হিসাবে ইলেক্ট্রন প্রবাহ ব্যবহার করে এবং তরঙ্গদৈর্ঘ্য দৃশ্যমান আলো থেকে কয়েক হাজার গুণ আলাদা, যা রেজোলিউশনকে ব্যাপকভাবে উন্নত করে। এটি একটি চৌম্বকীয় কুণ্ডলী একটি অপটিক্যাল অ্যামপ্লিফিকেশন সিস্টেম হিসাবে ব্যবহার করে এবং বিবর্ধন হাজার হাজার বা কয়েক হাজার বার পৌঁছাতে পারে। এটি প্রায়শই ভাইরাস কণা এবং ব্যাকটেরিয়াল আল্ট্রাস্ট্রাকচার পর্যবেক্ষণের জন্য ব্যবহৃত হয়।

দাগহীন মাইক্রোবিয়াল নমুনা পর্যবেক্ষণ:
দাগহীন নমুনাগুলি সাধারণত ব্যাকটেরিয়া আকারবিদ্যা, শক্তি এবং গতিবিধি পর্যবেক্ষণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। দাগ না থাকলে ব্যাকটেরিয়া বর্ণহীন এবং স্বচ্ছ হয় এবং প্রধানত ব্যাকটেরিয়ার প্রতিসরণ সূচক এবং পার্শ্ববর্তী পরিবেশের মধ্যে পার্থক্য দ্বারা একটি মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করা হয়। ফ্ল্যাজেলা সহ ব্যাকটেরিয়া জোরালোভাবে চলাচল করে, যখন ফ্ল্যাজেলা ছাড়া ব্যাকটেরিয়া অনিয়মিত ব্রাউনিয়ান গতি দেখায়। ট্রেপোনেমা প্যালিডাম, লেপ্টোস্পিরা এবং ক্যাম্পাইলোব্যাক্টারের মতো কার্যকর ব্যাকটেরিয়াগুলির স্বতন্ত্র আকার এবং চলাফেরার ধরণ রয়েছে, যা ডায়াগনস্টিক তাৎপর্যপূর্ণ। সাধারণভাবে ব্যবহৃত পদ্ধতি হল চাপ ড্রপ পদ্ধতি, দুল ড্রপ পদ্ধতি এবং কৈশিক পদ্ধতি।

1. ঝুলন্ত ড্রপ পদ্ধতিতে পরিষ্কার অবতল কাচের অবতল গর্তের চারপাশে ভ্যাসলিন প্রয়োগ করুন, ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশনের একটি রিং নিতে একটি ইনোকুলেশন লুপ ব্যবহার করুন এবং কভার গ্লাসের কেন্দ্রে রাখুন, তারপর অবতল কাচের অবতল গর্তটিকে সারিবদ্ধ করুন। কভার গ্লাসের মাঝখানে ড্রপটি ঢেকে দিন, তারপর এটিকে দ্রুত উল্টে দিন, কভার গ্লাসটি হালকাভাবে টিপুন যাতে এটি অবতল গর্তের প্রান্তে ভ্যাসলিনের সাথে শক্তভাবে লেগে থাকে এবং একটি উচ্চ-বিবর্ধন মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করুন (বা অন্ধকার ক্ষেত্র)।

2. একটি ইনোকুলেশন লুপ সহ ব্যাকটেরিয়াল সাসপেনশনের একটি রিং নিন এবং চাপ ড্রপ পদ্ধতিতে একটি পরিষ্কার কাচের স্লাইডের মাঝখানে রাখুন এবং ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশনটি বুদবুদ এবং ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশনের ওভারফ্লো এড়াতে সাবধানে একটি কভার গ্লাস দিয়ে ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশনটিকে আলতো করে ঢেকে দিন। . কয়েক সেকেন্ড স্থির থাকার পরে, উজ্জ্বল ক্ষেত্রে (বা অন্ধকার ক্ষেত্রে) একটি উচ্চ-শক্তি মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করুন।

3. কৈশিক পদ্ধতিটি মূলত অ্যানেরোবিক ব্যাকটেরিয়ার গতিবিদ্যা পরীক্ষার জন্য ব্যবহৃত হয়। সাধারণত 60~70মিমি লম্বা বেছে নিন। 05-1.0 মিমি অ্যাপারচার সহ একটি কৈশিকের মাধ্যমে অ্যানেরোবিক ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশন সিফন করার পরে, একটি শিখা দিয়ে কৈশিকটির দুটি প্রান্ত সিল করুন। কৈশিকটি প্লাস্টিকের কাগজ দিয়ে কাচের স্লাইডে স্থির করা হয়েছিল এবং অন্ধকার ক্ষেত্রে একটি উচ্চ-শক্তি লেন্সের নীচে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।

একটি মাইক্রোস্কোপ দিয়ে দাগযুক্ত জীবাণুর নমুনা পর্যবেক্ষণ:
ব্যাকটেরিয়ার নমুনা দাগ হওয়ার পরে, ব্যাকটেরিয়া এবং আশেপাশের পরিবেশের মধ্যে রঙের তীব্র বৈপরীত্যের কারণে, ব্যাকটেরিয়ার আকার, আকৃতি, বিন্যাস ইত্যাদি এবং কিছু বিশেষ কাঠামোর (যেমন) রূপগত বৈশিষ্ট্য ক্যাপসুল, ফ্ল্যাজেলা, স্পোর, ইত্যাদি) একটি সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের নীচে স্পষ্টভাবে পর্যবেক্ষণ করা যেতে পারে এবং স্টেনিং প্রতিক্রিয়া অনুসারে ব্যাকটেরিয়া শ্রেণীবদ্ধ এবং চিহ্নিত করা যেতে পারে।

(1) ব্যাকটেরিয়া দাগের সাধারণ পদ্ধতি ব্যাকটেরিয়া দাগের সাধারণ পদ্ধতি হল: স্মিয়ার (শুকানো)—স্থিরকরণ—দাগ দেওয়া।

1. রক্ত, নিঃসরণ, নিঃসরণ, পাংচার তরল এবং তরল কালচার এবং কাচের স্লাইডে সরাসরি পাতলা ফিল্ম স্মিয়ারের স্মিয়ার প্রস্তুত করা; ময়নাতদন্ত বা সংক্রামিত প্রাণীর টিস্যু, নমুনা নেওয়ার জন্য একটি তুলো দিয়ে ক্ষত ছিটিয়ে দিন। কঠিন মাধ্যমে ব্যাকটেরিয়া উপনিবেশ বা লন তৈরির জন্য, প্রথমে একটি ইনোকুলেশন লুপ ব্যবহার করে সাধারণ স্যালাইনের একটি রিং নিন এবং এটি কাচের স্লাইডের কেন্দ্রে রাখুন, তারপর একটি জীবাণুমুক্ত ইনোকুলেশন লুপ ব্যবহার করুন যাতে অল্প পরিমাণে কালচার নেওয়া যায় এবং পিষে নিন। এটি সাধারণ স্যালাইনে সমানভাবে, এটিকে 1 সেমি 2 প্রলিপ্ত পৃষ্ঠে ছড়িয়ে দিন এবং ঘরের তাপমাত্রায় স্বাভাবিকভাবে শুকাতে দিন বা দূরত্বে ধীরে ধীরে শুকাতে দিন।

2. ফিক্সেশনের উদ্দেশ্য হল ব্যাকটেরিয়া মেরে ফেলা, ব্যাকটেরিয়া প্রোটিন এবং গঠন জমাট করা এবং দাগ পড়া সহজ করা; ব্যাকটেরিয়াকে স্লাইডের সাথে লেগে থাকতে উৎসাহিত করুন যাতে ধোয়ার সময় পানিতে ধুয়ে না যায়; ব্যাকটেরিয়ার ব্যাপ্তিযোগ্যতা পরিবর্তন করে রঞ্জক, যা ব্যাকটেরিয়াল আন্তঃকোষীয় কাঠামোর দাগের জন্য উপকারী। এটি সাধারণত একটি শিখা দিয়ে গরম করে স্থির করা হয় এবং শুকনো স্মিয়ার দ্রুত 3 বার শিখার মধ্য দিয়ে চলে যায়। স্লাইড স্পর্শ করলে হাতের পেছনের ত্বকে পুড়ে না যাওয়াই ভালো।

3. রঞ্জনবিদ্যা বিভিন্ন পরিদর্শন উদ্দেশ্য অনুযায়ী, রঞ্জনবিদ্যা জন্য বিভিন্ন রঞ্জনবিদ্যা পদ্ধতি নির্বাচন করুন. রং করার সময়, কভারেজ বাড়ানোর জন্য ডাই দ্রবণটি ড্রপওয়াইজে যোগ করুন।

4. মর্ডান্ট যে কোনও পদার্থ যা রঞ্জক এবং রঙ্গিন বস্তুর মধ্যে সম্পর্ক বাড়াতে পারে, রঞ্জক বস্তুর উপর রঞ্জক স্থির করতে পারে এবং কোষের ঝিল্লির ব্যাপ্তিযোগ্যতার পরিবর্তন ঘটাতে পারে তাকে মর্ড্যান্ট বলে। সাধারণত ব্যবহার করা হয় অ্যালুম, ট্যানিক অ্যাসিড, ধাতব লবণ এবং আয়োডিন ইত্যাদি, এবং গরম করার জন্যও রঙ প্রচার করা হয়। মর্ডান্টগুলি প্রাথমিক স্টেনিং এবং কাউন্টারস্টেইনিংয়ের মধ্যে ব্যবহার করা যেতে পারে এবং ফিক্সেশনের পরেও ব্যবহার করা যেতে পারে বা ফিক্সেটিভ এবং স্টেনিংয়ের মধ্যেও থাকতে পারে।

5. রঙিনকরণ যে কোনো রাসায়নিক এজেন্ট যা রঙ্গিন বস্তুর রঙ অপসারণ করতে পারে তাকে ডিকলোরাইজার বলে। ইথানল, অ্যাসিটোন ইত্যাদি সাধারণত ডিকলোরাইজার হিসেবে ব্যবহৃত হয়। ডিকলারাইজিং এজেন্ট ব্যাকটেরিয়া এবং রঞ্জকগুলির সংমিশ্রণের স্থিতিশীলতার ডিগ্রি সনাক্ত করতে পারে, যা ডিফারেনশিয়াল স্টেনিংয়ের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।

6. কাউন্টারস্টেইনিং ব্যাকটেরিয়া বা তাদের গঠনগুলি যেগুলিকে বিবর্ণ করা হয়েছে তা প্রায়শই সহজ পর্যবেক্ষণের জন্য একটি কাউন্টারস্টেইন দ্রবণ দিয়ে প্রতিরোধ করা হয়। একটি তীক্ষ্ণ বৈসাদৃশ্য গঠনের জন্য কাউন্টারস্টেইনিং দ্রবণের রঙ প্রাথমিক ডাইং দ্রবণ থেকে ভিন্ন। কাউন্টারস্টেইনিং খুব শক্তিশালী হওয়া উচিত নয়, যাতে প্রাথমিক দাগের রঙ ঢেকে না যায়।