ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি কীভাবে প্রচলিত মাইক্রোস্কোপি থেকে আলাদা
আমি সম্প্রতি ইঁদুরের কিছু হিমায়িত অংশ তৈরি করার চেষ্টা করেছি, এবং এখন আমার একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করতে হবে যে ভাইরাসটি আমি ইনজেকশন দিয়েছি তা পছন্দসই মস্তিষ্কের এলাকায় আছে কিনা। ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির কিছু মৌলিক নীতি সংক্ষিপ্তভাবে অধ্যয়ন করা প্রয়োজন, এবং আমি সেগুলিও এখানে শেয়ার করব।
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ পরীক্ষিত বস্তুকে আলোকিত করার জন্য আলোর উত্স হিসাবে অতিবেগুনী আলো ব্যবহার করে, যার ফলে বস্তুটি একটি আলোর উত্স নির্গত করে এবং তারপরে মাইক্রোস্কোপের নীচে বস্তুটিকে পর্যবেক্ষণ করে। প্রধানত ইমিউনোফ্লুরোসেন্স কোষের জন্য ব্যবহৃত হয়, এটি একটি আলোর উৎস, ফিল্টার প্লেট সিস্টেম এবং অপটিক্যাল সিস্টেমের সমন্বয়ে গঠিত হয় যাতে আইপিস এবং অবজেক্টিভ লেন্সের ম্যাগনিফিকেশনের মাধ্যমে নমুনার ফ্লুরোসেন্স ইমেজ পর্যবেক্ষণ করা যায়। আসুন এই ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং একটি নিয়মিত অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের মধ্যে পার্থক্যটি দেখে নেওয়া যাক।
1. আলো পদ্ধতি পরিপ্রেক্ষিতে
একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের আলো পদ্ধতিটি সাধারণত একটি পতনশীল মরীচি পদ্ধতি ব্যবহার করে, যার অর্থ হল আলোর উত্সটি উদ্দেশ্যমূলক লেন্সের মাধ্যমে পরীক্ষার নমুনাতে অভিক্ষিপ্ত হয়।
2. রেজোলিউশন শর্তাবলী
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি আলোর উত্স হিসাবে অতিবেগুনী আলো ব্যবহার করে, তুলনামূলকভাবে ছোট তরঙ্গদৈর্ঘ্য কিন্তু সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের তুলনায় উচ্চতর রেজোলিউশনের সাথে।
3. ফিল্টারে পার্থক্য
একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ দুটি বিশেষ ফিল্টার ব্যবহার করে, একটি দৃশ্যমান আলোকে ফিল্টার করার জন্য আলোর উৎসের সামনে এবং অন্যটি অতিবেগুনী আলোকে ফিল্টার করার জন্য উদ্দেশ্য এবং আইপিসের মধ্যে, যা চোখকে রক্ষা করতে পারে।
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপিও এক ধরনের অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ, প্রধানত কারণ ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি দ্বারা উত্তেজিত তরঙ্গদৈর্ঘ্য ছোট, যা ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি এবং সাধারণ মাইক্রোস্কোপির গঠন এবং ব্যবহারে পার্থক্যের দিকে পরিচালিত করে। বেশিরভাগ ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলির দুর্বল আলো ক্যাপচার করার একটি ভাল কার্যকারিতা রয়েছে, তাই তাদের ইমেজিং ক্ষমতা অত্যন্ত দুর্বল ফ্লুরোসেন্সের অধীনেও ভাল। উপরন্তু, সাম্প্রতিক বছরগুলিতে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির ক্রমাগত উন্নতির সাথে, শব্দটিও উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। অতএব, আরও বেশি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ প্রয়োগ করা হচ্ছে।
দুই-ফোটন ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি সম্পর্কিত জ্ঞান
দ্বি-ফোটন উত্তেজনার মূল নীতি হল যে উচ্চ ফোটন ঘনত্বে, ফ্লুরোসেন্ট অণুগুলি একই সাথে দুটি দীর্ঘ তরঙ্গদৈর্ঘ্যের ফোটন শোষণ করতে পারে এবং তথাকথিত উত্তেজিত অবস্থার জীবনকালের অল্প সময়ের পরে, একটি ছোট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের ফোটন নির্গত করে; এর প্রভাব ফ্লুরোসেন্ট অণুকে উত্তেজিত করতে অর্ধেক দীর্ঘ তরঙ্গদৈর্ঘ্যের একটি ফোটন ব্যবহার করার মতোই। দুটি ফোটন উত্তেজনার জন্য একটি উচ্চ ফোটন ঘনত্ব প্রয়োজন, এবং ক্ষতিকারক কোষগুলি এড়াতে, একটি উচ্চ-শক্তি মোড-লকড পালস লেজার একটি দ্বি-ফোটন মাইক্রোস্কোপে ব্যবহার করা হয়। এই ধরনের লেজার দ্বারা নির্গত লেজারে উচ্চ শিখর শক্তি এবং নিম্ন গড় শক্তি রয়েছে, যার পালস প্রস্থ মাত্র 100 ফেমটোসেকেন্ড এবং 80 থেকে 100 মেগাহার্টজ পর্যন্ত ফ্রিকোয়েন্সি। একটি স্পন্দিত লেজারের ফোটন ফোকাস করার জন্য একটি উচ্চ সংখ্যাসূচক অ্যাপারচার উদ্দেশ্য ব্যবহার করার সময়, উদ্দেশ্যের কেন্দ্রবিন্দুতে ফোটনের ঘনত্ব সর্বাধিক হয় এবং দুই-ফোটন উত্তেজনা শুধুমাত্র উদ্দেশ্যের কেন্দ্রবিন্দুতে ঘটে। অতএব, একটি দুই-ফোটন মাইক্রোস্কোপের জন্য কনফোকাল পিনহোলের প্রয়োজন হয় না, যা ফ্লুরোসেন্স সনাক্তকরণের দক্ষতা উন্নত করে।
সাধারণ ফ্লুরোসেন্স ঘটনাতে, উত্তেজনার কম ফোটন ঘনত্বের কারণে, একটি ফ্লুরোসেন্ট অণু একই সময়ে শুধুমাত্র একটি ফোটন শোষণ করতে পারে এবং তারপর বিকিরণ পরিবর্তনের মাধ্যমে একটি ফ্লুরোসেন্ট ফোটন নির্গত করতে পারে, যাকে একক ফোটন ফ্লুরোসেন্স বলা হয়। আলোর উত্স হিসাবে লেজার ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স উত্তেজনা প্রক্রিয়ার জন্য, টু-ফোটন বা এমনকি মাল্টিফোটন ফ্লুরোসেন্স ঘটনা ঘটতে পারে। এই সময়ে, ব্যবহৃত উত্তেজনা আলোর উত্সটি উচ্চ তীব্রতার, এবং ফোটন ঘনত্ব ফ্লুরোসেন্ট অণুর জন্য একই সাথে দুটি ফোটন শোষণের প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে। উত্তেজনা আলোর উত্স হিসাবে একটি সাধারণ লেজার ব্যবহার করার প্রক্রিয়ায়, ফোটনের ঘনত্ব এখনও দুই-ফোটন শোষণের ঘটনা তৈরি করার জন্য যথেষ্ট নয়। সাধারণত, ফেমটোসেকেন্ড পালস লেজারগুলি ব্যবহার করা হয় এবং তাদের তাত্ক্ষণিক শক্তি মেগাওয়াট স্তরে পৌঁছাতে পারে। অতএব, দুই-ফোটন ফ্লুরোসেন্সের তরঙ্গদৈর্ঘ্য উত্তেজনার চেয়ে ছোট, যা অর্ধেক উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য উত্তেজনা দ্বারা উত্পাদিত প্রভাবের সমতুল্য।
