কিভাবে আপনি আপনার জন্য সঠিক কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ চয়ন করতে পারেন? কোন নির্দিষ্ট পদ্ধতি আছে?
কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির ওয়াইডফিল্ড মাইক্রোস্কোপির চেয়ে বেশি সুবিধা রয়েছে। কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি নমুনার অবিচ্ছিন্ন অপটিক্যাল বিভাগ করতে পারে এবং অ-ফোকাল প্লেন থেকে সংকেত হস্তক্ষেপ বাদ দিতে পারে। এই কারণে, কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির প্রয়োগ প্রকৃতপক্ষে আরও সাধারণ। তবে, বাজারে আরও বেশি কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ রয়েছে। কিভাবে নির্বাচন করবেন?
কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির ওয়াইডফিল্ড মাইক্রোস্কোপির চেয়ে বেশি সুবিধা রয়েছে। কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি নমুনার অবিচ্ছিন্ন অপটিক্যাল বিভাগ তৈরি করতে পারে এবং নন-ফোকাল প্লেন থেকে সংকেত হস্তক্ষেপ বাদ দিতে পারে। এই কারণে, কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি প্রকৃতপক্ষে আরও সাধারণ। তবে, বাজারে আরও বেশি কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ রয়েছে। কিভাবে নির্বাচন করবেন? কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ বাছাই করার সময়, দুটি মৌলিক এবং গুরুত্বপূর্ণ বিবেচনা রয়েছে: আপনি যে ধরনের নমুনা অধ্যয়ন করতে চান (যেমন, স্থির বা লাইভ কোষ), এবং আপনি যে ধরনের পরীক্ষা করতে চান (যেমন, স্ট্যাটিক বা গতিশীল সেলুলার প্রক্রিয়া)।
স্থির কোষের কনফোকাল ইমেজিং
স্থির এবং দাগযুক্ত কোষ বা টিস্যু চিত্রের জন্য, আমরা সাধারণত লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল (LSCM) নির্বাচন করি। এটি প্রধানত কারণ স্থির মৃত কোষের জীবিত কোষে দ্রুত জৈবিক ঘটনাগুলির অভাব রয়েছে এবং LSCM এর উচ্চ স্থানিক রেজোলিউশন থেকে আরও ভালভাবে উপকৃত হতে পারে। LSCM ইমেজিং হল লেজারের মাধ্যমে নমুনাটিকে অপটিক্যালি স্লাইস করা এবং স্ক্যান করার গতি (স্ক্যানিং অ্যারে মিররের গতির উপর নির্ভর করে) সাধারণত 1fps হয়। দীর্ঘ সময় এক্সপোজার মানে ফটোব্লিচিং এর বৃহত্তর ঝুঁকি, কিন্তু নির্দিষ্ট মৃত কোষের জন্য সময় গুরুত্বপূর্ণ নয় এবং আমরা একাধিক ছবি তুলে এটি গড় করতে পারি।
লাইভ কোষের কনফোকাল ইমেজিং
ইমেজিং লাইভ কোষের জন্য বন্ধুত্বপূর্ণ পরিবেশ থেকে অতিরিক্ত সুরক্ষা প্রয়োজন। ইমেজিং করার সময়, আমাদের প্রথম বিবেচনা হল কোষের কার্যক্ষমতা এবং স্বাস্থ্য বজায় রাখা। ধ্রুবক তাপমাত্রা গরম করার উপাদান এবং পারফিউশন সিস্টেমগুলি অপরিহার্য, বিশেষ করে সময়-বিপর্যয় অধ্যয়নের জন্য। জীবিত কোষের শারীরবৃত্তীয় অবস্থাকে নিয়ন্ত্রণ করে এমন দ্রুত জৈব রাসায়নিক ঘটনাগুলি বেশিরভাগ লোকেরা অধ্যয়ন করতে চায়, তবে এই ঘটনাগুলি প্রচলিত LSCM-এর জন্য খুব দ্রুত। এছাড়াও, LSCM-এর দীর্ঘায়িত এক্সপোজারও কোষের বিষাক্ত আলোর ক্ষতি করে। অতএব, ইমেজিং লাইভ কোষের জন্য বিশেষ কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ প্রয়োজন।
জীবিত কোষের কনফোকাল ইমেজিংয়ের জন্য সাধারণত দুটি বিকল্প রয়েছে: দ্রুত স্ক্যানিং লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল এবং স্পিনিং ডিস্ক কনফোকাল। দ্রুত স্ক্যানিং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি ধীর গতির গ্যালভানোমিটার মিররকে দ্রুত অনুরণিত স্ক্যানিং আয়না দিয়ে প্রতিস্থাপন করে, যা 30fps পর্যন্ত স্ক্যানিং গতি সক্ষম করে; স্পিনিং ডিস্ক কনফোকালের (SDCMs) দ্রুত স্ক্যানিংয়ের সুবিধা রয়েছে (যদিও অনিবার্যভাবে ক্ষতিকারক স্থানিক রেজোলিউশনে), এর গতি তাত্ত্বিকভাবে 2000fps-এ পৌঁছাতে পারে (অনুশীলনে এটি প্রায়শই অন্যান্য কারণের দ্বারা সীমাবদ্ধ)।
আপনি যদি ফটোব্লিচিং বা খুব দুর্বল ফ্লুরোসেন্স সংকেত সম্পর্কে উদ্বিগ্ন হন, তাহলে SDCM আরও উপযুক্ত হতে পারে। SDCM উত্তেজনা আলো ছড়িয়ে দিতে অ্যারেযুক্ত মাইক্রোওয়েল সহ দুটি ঘূর্ণায়মান ডিস্ক ব্যবহার করে। LSCM এর বিপরীতে, যা নমুনা স্পট স্ক্যান করে, SDCM এক সময়ে একাধিক দাগ (প্রায় 100 পিক্সেল দাগ) অর্জন করে, তাই গতি ব্যাপকভাবে বৃদ্ধি পায়, এবং SDCM-এর ফটোব্লিচিং এবং কম ফটোটক্সিসিটি। যাইহোক, আপনি স্ক্যানিং গতি বাড়ানোর জন্য দ্রুত স্ক্যানিং কনফোকাল ব্যবহার করতে পারেন, অত্যন্ত সংবেদনশীল ডিটেক্টরের সাথে মিলিত হয়ে, এবং আলোক শক্তি কমাতে ফটোটক্সিসিটি কমাতে, যা ঐতিহ্যবাহী কনফোকালগুলির সমৃদ্ধ ফাংশন বজায় রাখতে পারে।
স্বয়ংক্রিয় কনফোকাল ইমেজিং সিস্টেম
কিছু গবেষক তাদের ব্যক্তিগত প্রয়োজন অনুসারে মাইক্রোস্কোপ পরিবর্তন করার উপায় খুঁজে পেতে পছন্দ করেন। এবং কিছু গবেষক এমনকি অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি আসলে কীভাবে কাজ করে সে সম্পর্কে আগ্রহী নন। পরেরটির জন্য, একটি স্বয়ংক্রিয় কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ তাদের পছন্দের জন্য বেশি হতে পারে। উদাহরণস্বরূপ, Olympus FluoViewFV10i হল একটি সম্পূর্ণ স্বয়ংক্রিয় ডেস্কটপ 4-লেজার কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ। এর কমপ্যাক্ট ইন্টিগ্রেটেড স্ট্রাকচারের জন্য প্রায় কোন ইন্সটলেশন স্পেস লাগে না। এই ধরনের যন্ত্রটি গবেষকদের জন্য আদর্শ যাদের প্রতিদিন প্রচুর ইমেজ ডেটা অধিগ্রহণ করতে হয়, তবে অবশ্যই তারা ঐতিহ্যবাহী কনফোকালগুলির কার্যকারিতা এবং নমনীয়তা সম্পূর্ণরূপে প্রতিফলিত করে না। এছাড়াও, NikonA1 একটি সম্পূর্ণ স্বয়ংক্রিয় কনফোকাল সিস্টেম। বেশিরভাগ প্রচলিত কনফোকাল স্ক্যানিং মাইক্রোস্কোপের মতো, NikonA1 একটি গ্যালভানোমিটার স্ক্যান হেড ব্যবহার করে, যার রেজোলিউশন হাইব্রিড স্ক্যান হেডের সাথে A1R-এর তুলনায় উচ্চতর, তবে কিছুটা ধীর গতি (A1R ~30fps)
