ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি প্রযুক্তিগত পরামিতি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি কৌশল এবং পদ্ধতি
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ টেকনিক্যাল প্যারামিটার 1. ওয়াইড-এঙ্গেল আইপিস 2. অ্যাক্রোম্যাটিক অবজেক্টিভ লেন্স 3. ফোর-হোল অবজেক্টিভ লেন্স কনভার্টার 4. এপি-ফ্লুরোসেন্ট ডিভাইস ব্লু (B) গ্রিন (G) এক্সাইটেশন সিস্টেম 100W পারদ ল্যাম্প 5। সমাক্ষীয় মোটা এবং সূক্ষ্ম ফোকাস সমন্বয় প্রক্রিয়া: সমন্বয় ফোকাস পরিসীমা: 15 মিমি মাইক্রো-আন্দোলন গ্রিড মান: 0.002 মিমি 6. ডাবল-লেয়ার যান্ত্রিক টেবিল অনুদৈর্ঘ্য আন্দোলন পরিসীমা: 70 মিমি পার্শ্বীয় আন্দোলনের পরিসীমা: 50 মিমি
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ প্রযুক্তিগত পরামিতি
1. ওয়াইড-এঙ্গেল আইপিস
2. অ্যাক্রোম্যাটিক অবজেক্টিভ লেন্স
3. চার অ্যাপারচার নাকপিস
4. এপি-ফ্লুরোসেন্স ডিভাইস নীল (B) সবুজ (G) উত্তেজনা সিস্টেম 100W পারদ বাতি
5. সমাক্ষীয় মোটা এবং সূক্ষ্ম ফোকাস সমন্বয় প্রক্রিয়া: ফোকাস পরিসীমা 15 মিমি ফাইন মুভমেন্ট গ্রিড মান 0.002 মিমি
6. ডাবল-স্তর যান্ত্রিক ওয়ার্কবেঞ্চ
উল্লম্ব আন্দোলন পরিসীমা: 70 মিমি পার্শ্বীয় আন্দোলন পরিসীমা: 50 মিমি
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি দক্ষতা এবং পদ্ধতি
(1) কাচের স্লাইড
গ্লাস স্লাইডের পুরুত্ব 0.8 এবং 1.2 মিমি এর মধ্যে হওয়া উচিত। খুব পুরু একটি স্লাইড একদিকে আরও আলো শোষণ করবে, এবং অন্যদিকে, উত্তেজনা আলো নমুনার উপর কেন্দ্রীভূত হতে পারে না। স্লাইডগুলি অবশ্যই মসৃণ, বেধে অভিন্ন এবং সুস্পষ্ট অটোফ্লোরেসেন্স থেকে মুক্ত হতে হবে। কখনও কখনও কোয়ার্টজ গ্লাস স্লাইড ব্যবহার করা হয়।
(2) কাচের আবরণ
কভার গ্লাসের বেধ প্রায় 0.17 মিমি, মসৃণ। উত্তেজনা আলোকে শক্তিশালী করার জন্য, একটি হস্তক্ষেপ কভার গ্লাসও ব্যবহার করা যেতে পারে, যা একটি বিশেষ কভার গ্লাস যা বিভিন্ন স্তরের পদার্থ (যেমন ম্যাগনেসিয়াম ফ্লোরাইড) দিয়ে প্রলিপ্ত যা বিভিন্ন তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলোতে বিভিন্ন হস্তক্ষেপের প্রভাব ফেলে, যা তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলোকে শক্তিশালী করতে পারে। ফ্লুরোসেন্স মসৃণভাবে যান। উত্তেজনাপূর্ণ আলোর মধ্য দিয়ে যায় এবং প্রতিফলিত হয় এবং এই প্রতিফলিত উত্তেজনা আলো নমুনাকে উত্তেজিত করে।
(3) নমুনা
টিস্যু স্লাইস বা অন্যান্য নমুনা খুব ঘন হওয়া উচিত নয়। যদি এটি খুব পুরু হয়, তবে বেশিরভাগ উত্তেজনা আলো নমুনার নীচের অংশে গ্রাস করা হবে, অন্যদিকে উদ্দেশ্যমূলক লেন্স দ্বারা সরাসরি পর্যবেক্ষণ করা উপরের অংশটি পুরোপুরি উত্তেজিত হবে না। উপরন্তু, কোষ ওভারল্যাপিং বা অপবিত্রতা আবরণ, রায় প্রভাবিত.
(4) মাউন্ট এজেন্ট
গ্লিসারিন সাধারণত একটি মাউন্টিং এজেন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয়, যার কোনো অটোফ্লুরেসেন্স, বর্ণহীন এবং স্বচ্ছ হওয়া উচিত নয় এবং ফ্লুরোসেন্সের উজ্জ্বলতা pH 8-এ উজ্জ্বল হয়৷{1}}.5, এবং এটি দ্রুত বিবর্ণ হওয়া সহজ নয়৷ তাই, গ্লিসারল এবং 0.5mol/l কার্বনেট বাফার দ্রবণের সমান মিশ্রণ যার pH 9।{6}} থেকে 9.5 সাধারণত মাউন্টিং এজেন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয়।
(5) আয়নার তেল
সাধারণত, ডার্ক-ফিল্ড ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং তেল নিমজ্জন নিমজ্জন লেন্স দিয়ে নমুনা পর্যবেক্ষণ করার সময়, নিমজ্জন তেল ব্যবহার করা আবশ্যক। বিশেষ অ-ফ্লুরোসেন্ট নিমজ্জন তেল ব্যবহার করা ভাল। এর পরিবর্তে উপরের গ্লিসারিনও ব্যবহার করা যেতে পারে, এবং তরল প্যারাফিনও ব্যবহার করা যেতে পারে, তবে প্রতিসরণ সূচক কম, যা ছবির মানের উপর সামান্য প্রভাব ফেলে। প্রভাব।
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের নীতি এবং কাঠামোগত বৈশিষ্ট্য
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের (যেমন অতিবেগুনী আলো 3650 ইঞ্চি বা বেগুনি নীল আলো 4200 ইঞ্চি) আলো নির্গত করার জন্য উচ্চ উজ্জ্বল দক্ষতার একটি বিন্দু ব্যবহার করে ফিল্টার সিস্টেমের মাধ্যমে উত্তেজনা আলো হিসাবে ফ্লুরোসেন্স নির্গত করার নমুনায় ফ্লুরোসেন্ট পদার্থকে উত্তেজিত করতে। বিভিন্ন রং এর পরে, অবজেক্টিভ লেন্স এবং আইপিসের বিবর্ধনের মাধ্যমে পর্যবেক্ষণ করুন। এইভাবে, একটি শক্তিশালী বৈসাদৃশ্য পটভূমির অধীনে, এমনকি যদি ফ্লুরোসেন্স খুব দুর্বল হয়, এটি সনাক্ত করা সহজ এবং উচ্চ সংবেদনশীলতা রয়েছে। এটি প্রধানত কোষের গঠন এবং ফাংশন এবং রাসায়নিক গঠন গবেষণার জন্য ব্যবহৃত হয়। একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের মৌলিক কাঠামো একটি সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ এবং কিছু আনুষাঙ্গিক (যেমন একটি ফ্লুরোসেন্ট আলোর উৎস, একটি উত্তেজনা ফিল্টার, একটি দুই রঙের বিম স্প্লিটার এবং একটি ব্লকিং ফিল্টার ইত্যাদি) দিয়ে গঠিত। ফ্লুরোসেন্ট আলোর উৎস—সাধারণত অতি-উচ্চ চাপ পারদ বাতি (50-200W) ব্যবহার করে, যা বিভিন্ন তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলো নির্গত করতে পারে, কিন্তু প্রতিটি ফ্লুরোসেন্ট পদার্থের একটি উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য থাকে যা সবচেয়ে শক্তিশালী ফ্লুরোসেন্স তৈরি করে, তাই একটি উত্তেজনা ফিল্টার (সাধারণত, অতিবেগুনী, বেগুনি, নীল এবং সবুজ উত্তেজনা ফিল্টার আছে), যা শুধুমাত্র একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের উত্তেজনা আলোকে অন্য আলো শোষণ করার সময় নমুনাকে বিকিরণ করতে দেয়। প্রতিটি পদার্থ উত্তেজনা আলো দ্বারা বিকিরণিত হওয়ার পরে, এটি খুব অল্প সময়ের মধ্যে বিকিরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্যের চেয়ে দীর্ঘতর তরঙ্গদৈর্ঘ্য সহ দৃশ্যমান প্রতিপ্রভ নির্গত করে। ফ্লুরোসেন্স নির্দিষ্ট এবং উত্তেজনা আলোর তুলনায় সাধারণত দুর্বল। নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্স পর্যবেক্ষণ করার জন্য, অবজেক্টিভ লেন্সের পিছনে ব্লকিং (বা দমন) যোগ করতে হবে এবং এটির সাথে একত্রে ব্যবহার করতে হবে।
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং সাধারণ মাইক্রোস্কোপের মধ্যে পার্থক্য
1. আলোকসজ্জা পদ্ধতিটি সাধারণত এপিস্কোপিক হয়, অর্থাৎ, আলোর উত্সটি উদ্দেশ্যমূলক লেন্সের মাধ্যমে নমুনার উপর প্রক্ষিপ্ত হয়;
2. আলোর উৎস হল অতিবেগুনী রশ্মি, তরঙ্গদৈর্ঘ্য ছোট, এবং রেজোলিউশন সাধারণ মাইক্রোস্কোপের চেয়ে বেশি;
3. দুটি বিশেষ ফিল্টার আছে, আলোর উৎসের সামনের একটি দৃশ্যমান আলোকে ফিল্টার করার জন্য ব্যবহার করা হয় এবং আইপিস এবং অবজেক্টিভ লেন্সের মধ্যবর্তী একটিটি মানুষের চোখের সুরক্ষার জন্য অতিবেগুনী রশ্মি ফিল্টার করতে ব্যবহৃত হয়।
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপও এক ধরনের অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ, প্রধান পার্থক্য হল দুটির উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য ভিন্ন। এটি গঠন এবং ব্যবহারের ক্ষেত্রে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের মধ্যে পার্থক্য নির্ধারণ করে।
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি ইমিউনোফ্লোরসেন্ট সাইটোকেমিস্ট্রির একটি অপরিহার্য হাতিয়ার। এটি প্রধান উপাদান যেমন আলোর উৎস, ফিল্টার প্লেট সিস্টেম এবং অপটিক্যাল সিস্টেমের সমন্বয়ে গঠিত। এটি হল ফ্লুরোসেন্স নির্গত করার জন্য নমুনাকে উত্তেজিত করার জন্য আলোর একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করা, এবং উদ্দেশ্যমূলক লেন্স এবং আইপিস সিস্টেমকে প্রশস্ত করে নমুনার ফ্লুরোসেন্স ইমেজ পর্যবেক্ষণ করা।
