ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের পার্থক্য এবং বৈশিষ্ট্য
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ আলাদা, এটি নমুনা পর্যবেক্ষণ করার জন্য সাধারণ আলোর উত্সের আলোকসজ্জার মাধ্যমে নয়, নমুনার মধ্যে একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলো (সাধারণত অতিবেগুনি, নীল-বেগুনি আলো) ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্ট উপাদানের উত্তেজনা। অণুবীক্ষণ যন্ত্রের অধীনে, যাতে ফ্লুরোসেন্স অণুবীক্ষণ যন্ত্রের আলোর উৎস সরাসরি আলোকসজ্জা না করে, কিন্তু শক্তির উৎসের নমুনার মধ্যে ফ্লুরোসেন্ট উপাদানের এক ধরনের উত্তেজনা হিসেবে। যে কারণে আমরা নমুনাটি পর্যবেক্ষণ করতে পারি তা আলোর উত্সের আলোকসজ্জার কারণে নয়, উত্তেজনার আলোক শক্তি শোষণ করার পরে নমুনায় ফ্লুরোসেন্ট উপাদান দ্বারা উপস্থাপিত প্রতিপ্রভ ঘটনা। এটি দেখা যায় যে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের বৈশিষ্ট্যগুলি, প্রধানত এর আলোর উত্সটি উত্তেজনা আলোর নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের পরিসীমার একটি বড় সংখ্যা সরবরাহ করতে পারে, যাতে পরীক্ষিত নমুনার মধ্যে ফ্লুরোসেন্ট উপাদান উত্তেজনা আলোর প্রয়োজনীয় তীব্রতা পেতে পারে। একই সময়ে, ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের একটি সংশ্লিষ্ট ফিল্টার সিস্টেম থাকতে হবে। ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ হল ফ্লুরোসেন্স হিস্টোকেমিস্ট্রির মৌলিক হাতিয়ার। এটি অতি-উচ্চ চাপের আলোর উত্স, ফিল্টার সিস্টেম (উত্তেজনা এবং দমন ফিল্টার প্লেট সহ), অপটিক্যাল সিস্টেম এবং ফটোগ্রাফিক সিস্টেম এবং অন্যান্য প্রধান উপাদানগুলির সমন্বয়ে গঠিত, প্রতিপ্রভা নির্গত করতে নমুনাকে উদ্দীপিত করতে আলোর একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের ব্যবহার।
1. ফ্লুরোসেন্স উত্তেজনার উপায়: আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্যের পরিসর অনুযায়ী UV উত্তেজনা পদ্ধতিতে বিভক্ত (আল্ট্রাভায়োলেট আলোকসজ্জা ব্যবহার করে) এবং BV উত্তেজনা পদ্ধতি (নীল বেগুনি আলো ব্যবহার করে) দুটি ধরণের UV উত্তেজনা পদ্ধতি অতিবেগুনী আলোর কাছাকাছি 400nm এর চেয়ে ছোট। উত্তেজনা এই পদ্ধতিতে কোনও দৃশ্যমান উত্তেজনা আলো নেই, তাই পর্যবেক্ষিত ফ্লুরোসেন্স রঞ্জকের অন্তর্নিহিত প্রতিপ্রভা দেখায় এবং পটভূমি টিস্যুর স্ব-প্রতিপ্রভা থেকে নমুনার নির্দিষ্ট প্রতিপ্রভাকে আলাদা করা সহজ।
2. BV উত্তেজনা পদ্ধতি: পদ্ধতিটি উত্তেজনার জন্য 404nm, 434nm অতিবেগুনী থেকে নীল আলোতে কেন্দ্রীভূত। এই পদ্ধতিটি নমুনাকে বিকিরণ করতে নীল আলো ব্যবহার করে, তাই ফ্লুরোসেন্স পর্যবেক্ষণ সিস্টেমের কাট-অফ ফিল্টারটি অবশ্যই এমন একটি ফিল্টার ব্যবহার করবে যা সম্পূর্ণরূপে নীল আলোকে ব্লক করতে পারে এবং পর্যাপ্তভাবে পছন্দসই সবুজ এবং হলুদ ফ্লুরোসেন্স পাস করতে পারে। ফ্লুরোসেন্ট অ্যান্টিবডি পদ্ধতির জন্য ফ্লুরোসেন্ট রঙ্গক। যেহেতু উত্তেজনা আলোর সর্বাধিক শোষণের তরঙ্গদৈর্ঘ্য এবং ফ্লুরোসেন্সের সর্বাধিক নির্গমনের তরঙ্গদৈর্ঘ্য একে অপরের কাছাকাছি, তাই BV উত্তেজনা পদ্ধতিতে ব্যবহৃত ফিল্টারগুলি অবশ্যই তীক্ষ্ণ কাট-অফ ফিল্টার হতে হবে। এই পদ্ধতিটি নীল আলোকে উত্তেজনার আলো হিসাবে ব্যবহার করে, তাই ফ্লুরোক্রোমের শোষণ দক্ষতা বেশি এবং একটি উজ্জ্বল চিত্র পাওয়া যায়। অসুবিধা হল যে 500 এনএম এর নিচে ফ্লুরোসেন্স দেখা যায় না এবং 500 এনএম এর উপরে পুরো চিত্রটি হলুদ দেখায়। ফ্লুরোসেন্ট অ্যান্টিবডি পদ্ধতিতে, বেশিরভাগ নির্দিষ্টতা ফ্লুরোক্রোমের অনন্য রঙ দ্বারা বিচার করা হয়, তাই সূক্ষ্ম নির্দিষ্টতা নিয়ে আলোচনা করার সময় উপরে বর্ণিত BV উত্তেজনা পদ্ধতির অসুবিধাগুলি অত্যন্ত প্রভাবশালী হতে থাকে।
