একটি অণুবীক্ষণ যন্ত্রের সাহায্যে অণুজীবের সরাসরি গণনা
পরীক্ষামূলক নীতি
একটি হেমোসাইটোমিটার ব্যবহার করে একটি মাইক্রোস্কোপের অধীনে সরাসরি গণনা একটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত মাইক্রোবিয়াল গণনা পদ্ধতি। এই পদ্ধতির সুবিধা হল এটি স্বজ্ঞাত এবং দ্রুত। হিমোসাইটোমিটারের স্লাইড এবং কভার গ্লাসের মধ্যে গণনা চেম্বারে যথাযথভাবে মিশ্রিত ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশন (বা স্পোর সাসপেনশন) রাখুন এবং মাইক্রোস্কোপের নীচে গণনা করুন। যেহেতু কাউন্টিং চেম্বারের আয়তন স্থির (0.1mm2), তাই এটি মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করা অণুজীবের সংখ্যা অনুসারে প্রতি ইউনিট আয়তনে মোট অণুজীবের সংখ্যায় রূপান্তরিত হতে পারে। যেহেতু এই পদ্ধতিটি জীবিত এবং মৃত ব্যাকটেরিয়ার যোগফল গণনা করে, এটিকে মোট ব্যাকটেরিয়া গণনা পদ্ধতিও বলা হয়।
একটি হেমোসাইটোমিটার সাধারণত একটি বিশেষ কাচের স্লাইড যার উপর চারটি খাঁজ তিনটি প্ল্যাটফর্ম তৈরি করে। মাঝখানের প্ল্যাটফর্মটি একটি ছোট অনুভূমিক খাঁজ দ্বারা দুটি অংশে বিভক্ত। প্রতিটি পাশে প্ল্যাটফর্মে একটি গ্রিড খোদাই করা আছে। প্রতিটি গ্রিড নয়টি বড় স্কোয়ারে বিভক্ত। মাঝখানে বড় চত্বরটি গণনার ঘর। অণুজীব গণনা চেম্বারে গণনা করা হয়। রক্ত কণিকা গণনা বোর্ডের গঠন চিত্র Ⅷ-1 এ দেখানো হয়েছে।
গণনা কক্ষের স্কেলটিতে সাধারণত দুটি বৈশিষ্ট্য থাকে, একটি হল একটি বড় বর্গক্ষেত্রকে 16টি মধ্য বর্গক্ষেত্রে বিভক্ত করা হয় এবং প্রতিটি মধ্যম বর্গক্ষেত্রকে 25টি ছোট বর্গক্ষেত্রে বিভক্ত করা হয় (চিত্র Ⅷ-2); অন্যটি একটি বড় বর্গক্ষেত্র। বর্গক্ষেত্রটি 25টি মধ্য বর্গক্ষেত্রে বিভক্ত, এবং প্রতিটি মধ্যম বর্গক্ষেত্র 16টি ছোট বর্গক্ষেত্রে বিভক্ত (চিত্র Ⅷ-1, C)। কিন্তু গণনা বোর্ড যে ধরনেরই হোক না কেন, প্রতিটি বড় বর্গক্ষেত্রে ছোট বর্গক্ষেত্রের সংখ্যা একই, অর্থাৎ 16×25=400 ছোট বর্গক্ষেত্র, যেমন চিত্র Ⅷ-2 দেখানো হয়েছে।
প্রতিটি বড় বর্গক্ষেত্রের পাশের দৈর্ঘ্য 1 মিমি এবং প্রতিটি বড় বর্গক্ষেত্রের ক্ষেত্রফল 1 মিমি 2। কভার গ্লাসটি ঢেকে যাওয়ার পরে, স্লাইড গ্লাস এবং কভার গ্লাসের মধ্যে উচ্চতা হল 0.1 মিমি, তাই গণনা চেম্বারের আয়তন হল 0.1 মিমি 3।
গণনা করার সময়, সাধারণত পাঁচটি মধ্যম গ্রিডে ব্যাকটেরিয়ার মোট সংখ্যা গণনা করুন, তারপরে প্রতিটি মধ্যম গ্রিডের গড় মান নিন এবং তারপরে একটি বড় গ্রিডে ব্যাকটেরিয়ার মোট সংখ্যা পেতে 16 বা 25 দ্বারা গুণ করুন এবং তারপরে রূপান্তরিত করুন। 1ml ব্যাকটেরিয়া দ্রবণে ব্যাকটেরিয়া মোট সংখ্যা।
পরীক্ষাগার সরঞ্জাম
হিমোসাইটোমিটার, মাইক্রোস্কোপ, কভারস্লিপ, জীবাণুমুক্ত কৈশিক;
পরীক্ষামূলক উপকরণ
Saccharomyces cerevisiae সাসপেনশন
পরীক্ষামূলক পদ্ধতি (মাইক্রোবিয়াল মাইক্রোস্কোপ সরাসরি গণনা পদ্ধতি)
1. পাতলা
সঠিকভাবে Saccharomyces cerevisiae সাসপেনশন পাতলা করুন। ব্যাকটেরিয়া দ্রবণ ঘন না হলে, এটি পাতলা করার প্রয়োজন নেই।
2. মাইক্রোস্কোপিক গণনা ঘর
নমুনা যোগ করার আগে, গণনা প্লেটের গণনা চেম্বারের একটি মাইক্রোস্কোপিক পরিদর্শন করুন। ময়লা থাকলে তা গণনার আগে পরিষ্কার করতে হবে।
3. নমুনা যোগ করুন
একটি কভার গ্লাস দিয়ে পরিষ্কার এবং শুষ্ক হিমোসাইটোমিটার প্লেটটি ঢেকে দিন এবং তারপরে একটি জীবাণুমুক্ত ফাইন-মাউথ ড্রপার ব্যবহার করে কভার গ্লাসের প্রান্ত থেকে মিশ্রিত Saccharomyces cerevisiae দ্রবণের একটি ছোট ফোঁটা ফেলে দিন (খুব বেশি নয়), যাতে ব্যাকটেরিয়া সমাধান ফাঁক বরাবর ফাঁক কাছাকাছি হয়. কৈশিক অসমোসিস নিজেই গণনা চেম্বারে প্রবেশ করে এবং সাধারণ গণনা চেম্বারটি ব্যাকটেরিয়া তরল দিয়ে পূর্ণ হতে পারে। সতর্কতা অবলম্বন করুন যাতে বাতাসের বুদবুদ না থাকে।
4. মাইক্রোস্কোপ গণনা
5 মিনিটের জন্য বিশ্রামের পরে, হিমোসাইটোমিটারটি মাইক্রোস্কোপের মঞ্চে রাখুন, গণনা চেম্বারের অবস্থান খুঁজে পেতে প্রথমে একটি কম শক্তির লেন্স ব্যবহার করুন এবং তারপর গণনার জন্য একটি উচ্চ শক্তির লেন্সে স্যুইচ করুন। যদি এটি পাওয়া যায় যে ব্যাকটেরিয়া দ্রবণটি গণনার আগে খুব ঘন বা খুব পাতলা, তবে গণনার আগে এটি পুনরায় তরল করা প্রয়োজন। সাধারণত, নমুনা পাতলা করার জন্য প্রতিটি কোষে প্রায় 5-10 ব্যাকটেরিয়া প্রয়োজন। প্রতিটি গণনা চেম্বার গণনার জন্য 5টি মধ্যম গ্রিডে (ঐচ্ছিক 4টি কোণ এবং কেন্দ্রীয় গ্রিড) ব্যাকটেরিয়া নির্বাচন করে। গ্রিড লাইনের ব্যাকটেরিয়া সাধারণত শুধুমাত্র উপরের এবং ডান লাইনে গণনা করা হয়। ইস্ট বাডিং এর ক্ষেত্রে, যখন কুঁড়ি শরীরের আকার মাতৃ কোষের অর্ধেক পৌঁছে যায়, তখন দুটি ব্যাকটেরিয়া গণনা করুন। দুটি গণনা চেম্বারে গণনা করা মানগুলি থেকে নমুনার ব্যাকটেরিয়া সামগ্রী গণনা করার জন্য একটি নমুনা গণনা করুন।
5. হেমোসাইটোমিটার পরিষ্কার করা
ব্যবহারের পরে, জলের জেট দিয়ে কলের রক্ত কোষ গণনা প্লেটটি ধুয়ে ফেলুন, এটি শক্ত জিনিস দিয়ে ধুয়ে ফেলবেন না এবং ধোয়ার পরে নিজেই বা হেয়ার ড্রায়ার দিয়ে শুকিয়ে নিন। মাইক্রোস্কোপিক পরীক্ষা, প্রতিটি কোষে অবশিষ্ট ব্যাকটেরিয়া বা অন্যান্য পলি আছে কিনা তা পর্যবেক্ষণ করুন। যদি এটি পরিষ্কার না হয় তবে এটি পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত বারবার ধুয়ে ফেলতে হবে।
