একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং একটি সাধারণ মাইক্রোস্কোপের মধ্যে পার্থক্য
আমি সম্প্রতি ইঁদুরের কিছু হিমায়িত অংশ তৈরি করার চেষ্টা করেছি। এর পরে, আমি একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করব যাতে আমি যে ভাইরাসটি ইনজেকশন দিয়েছিলাম তা আমার মস্তিষ্কের এলাকায় আছে কিনা। ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির কিছু মৌলিক নীতি সংক্ষেপে শিখতে হবে এবং আমি সেগুলি এখানে শেয়ার করব।
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলি পরিদর্শন করা বস্তুকে আলোকিত করার জন্য আলোর উত্স হিসাবে অতিবেগুনী আলো ব্যবহার করে, যার ফলে বস্তুটি আলো নির্গত করে এবং তারপর মাইক্রোস্কোপের নীচে বস্তুটিকে পর্যবেক্ষণ করে। এটি প্রধানত ইমিউনোফ্লোরেসেন্স কোষের জন্য ব্যবহৃত হয়। এটি প্রধানত একটি আলোর উৎস, একটি ফিল্টার প্লেট সিস্টেম এবং একটি অপটিক্যাল সিস্টেমের সমন্বয়ে গঠিত। নমুনার ফ্লুরোসেন্ট চিত্রটি আইপিস এবং অবজেক্টিভ লেন্সের বিবর্ধনের মাধ্যমে পরিলক্ষিত হয়। আসুন একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং একটি সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের মধ্যে পার্থক্যটি দেখে নেওয়া যাক।
1. আলো পদ্ধতি তাকান
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের আলোকসজ্জা পদ্ধতিটি সাধারণত এপি-ইলুমিনেশন, যার অর্থ হল আলোর উত্সটি উদ্দেশ্যমূলক লেন্সের মাধ্যমে পরীক্ষার নমুনায় স্থাপন করা হয়।
2. রেজোলিউশন দেখুন
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলি আলোর উত্স হিসাবে অতিবেগুনী আলো ব্যবহার করে, যার তরঙ্গদৈর্ঘ্য ছোট কিন্তু সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের তুলনায় উচ্চতর রেজোলিউশন রয়েছে।
3. ফিল্টার মধ্যে পার্থক্য
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ দুটি বিশেষ ফিল্টার ব্যবহার করে, একটি দৃশ্যমান আলোকে ফিল্টার করার জন্য আলোর উৎসের সামনে ব্যবহার করা হয় এবং একটি অতিবেগুনি রশ্মিকে ফিল্টার করার জন্য অবজেক্টিভ লেন্স এবং আইপিসের মধ্যে ব্যবহৃত হয়, যা মানুষের চোখকে রক্ষা করতে পারে।
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপও এক ধরনের অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ। প্রধান কারণ হল যে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ দ্বারা উত্তেজিত তরঙ্গদৈর্ঘ্য ছোট, তাই এটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং সাধারণ অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মধ্যে গঠন এবং ব্যবহারের পার্থক্যের দিকে পরিচালিত করে। বেশিরভাগ ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের দুর্বল আলো ক্যাপচার করার ভালো কাজ আছে। , তাই এর ইমেজিং ক্ষমতা অত্যন্ত দুর্বল ফ্লুরোসেন্সের অধীনেও ভাল। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলির ক্রমাগত উন্নতির সাথে সাথে, শব্দটিও ব্যাপকভাবে হ্রাস পেয়েছে। অতএব, আরও বেশি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করা হচ্ছে।
দুই ফোটন ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি সম্পর্কে জ্ঞান
দ্বি-ফোটন উত্তেজনার মূল নীতি হল: উচ্চ ফোটন ঘনত্বের শর্তে, ফ্লুরোসেন্ট অণুগুলি একই সময়ে দুটি দীর্ঘ-তরঙ্গদৈর্ঘ্যের ফোটন শোষণ করতে পারে এবং একটি সংক্ষিপ্ত তথাকথিত উত্তেজিত অবস্থার জীবনকালের পরে, একটি ছোট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের একটি ফোটন নির্গত করতে পারে। . ;প্রভাবটি ফ্লুরোসেন্ট অণুকে উত্তেজিত করার জন্য একটি তরঙ্গদৈর্ঘ্যের অর্ধেক দীর্ঘ তরঙ্গদৈর্ঘ্যের ফোটন ব্যবহার করার মতোই। দ্বি-ফোটন উত্তেজনার জন্য একটি উচ্চ ফোটন ঘনত্ব প্রয়োজন। কোষের ক্ষতি না করার জন্য, দুই-ফোটন মাইক্রোস্কোপ উচ্চ-শক্তি মোড-লকড পালস লেজার ব্যবহার করে। এই লেজারটি উচ্চ শিখর শক্তি এবং নিম্ন গড় শক্তি সহ লেজার আলো নির্গত করে, যার পালস প্রস্থ মাত্র 100 ফেমটোসেকেন্ড এবং 80 থেকে 100 MHz ফ্রিকোয়েন্সি। স্পন্দিত লেজারের ফোটন ফোকাস করার জন্য উচ্চ সংখ্যাসূচক অ্যাপারচার অবজেক্টিভ লেন্স ব্যবহার করার সময়, অবজেক্টিভ লেন্সের ফোটনের ঘনত্ব সবচেয়ে বেশি। দুই-ফোটন উত্তেজনা শুধুমাত্র উদ্দেশ্যমূলক লেন্সের ফোকাসে ঘটে, তাই দুই-ফোটন মাইক্রোস্কোপের জন্য কনফোকাল পিনহোলের প্রয়োজন হয় না, যা ফ্লুরোসেন্স সনাক্তকরণের দক্ষতা উন্নত করে।
সাধারণ ফ্লুরোসেন্স প্রপঞ্চে, উত্তেজনা আলোর কম ফোটন ঘনত্বের কারণে, একটি ফ্লুরোসেন্ট অণু একই সময়ে শুধুমাত্র একটি ফোটন শোষণ করতে পারে এবং তারপর একটি বিকিরণ পরিবর্তনের মাধ্যমে একটি প্রতিপ্রভ ফোটন নির্গত করতে পারে। এটি একক-ফোটন ফ্লুরোসেন্স। আলোর উত্স হিসাবে লেজার ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স উত্তেজনা প্রক্রিয়ার জন্য, টু-ফোটন বা এমনকি মাল্টি-ফোটন ফ্লুরোসেন্স ঘটনা ঘটতে পারে। এই ক্ষেত্রে, ব্যবহৃত উত্তেজনা আলোর উত্সের তীব্রতা বেশি, এবং ফোটনের ঘনত্ব ফ্লুরোসেন্ট অণুর জন্য একই সময়ে দুটি ফোটন শোষণের প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে। উত্তেজনা আলোর উত্স হিসাবে সাধারণ লেজারগুলি ব্যবহার করার প্রক্রিয়ায়, ফোটনের ঘনত্ব এখনও দুই-ফোটন শোষণের জন্য যথেষ্ট নয়। ফেমটোসেকেন্ড পালস লেজারগুলি সাধারণত ব্যবহৃত হয় এবং তাদের তাত্ক্ষণিক শক্তি মেগাওয়াট স্তরে পৌঁছাতে পারে। অতএব, দুই-ফোটন ফ্লুরোসেন্সের তরঙ্গদৈর্ঘ্য উত্তেজনা আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্যের চেয়ে ছোট, যা অর্ধ-উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য উত্তেজনা দ্বারা উত্পাদিত প্রভাবের সমতুল্য।
