অণুজীবের সংখ্যা নির্ণয়-মাইক্রোস্কোপিক প্রত্যক্ষ গণনা পদ্ধতি!
ব্যাকটেরিয়া জনসংখ্যা বৃদ্ধি কোষ সংখ্যা বৃদ্ধি বা সেলুলার উপাদান বৃদ্ধি দ্বারা উদ্ভাসিত হয়. কোষের সংখ্যা নির্ধারণের পদ্ধতিগুলির মধ্যে রয়েছে সরাসরি মাইক্রোস্কোপিক গণনা, প্লেট গণনা, স্পেকট্রোফটোমিটার দ্বারা টার্বিডিটি অনুমান, সর্বাধিক সম্ভাব্য সংখ্যা MPN এবং ঝিল্লি পরিস্রাবণ। (মেমব্রেন পরিস্রাবণ) ইত্যাদি। সেলুলার পদার্থ পরিমাপের পদ্ধতিগুলির মধ্যে রয়েছে কোষের শুষ্ক ওজন নির্ধারণ, নির্দিষ্ট কোষের উপাদান যেমন নাইট্রোজেন সামগ্রী, আরএনএ এবং ডিএনএ সামগ্রী এবং বিপাকীয় পণ্যগুলির নির্ধারণ। সংক্ষেপে, অণুজীবের বৃদ্ধি পরিমাপের জন্য অনেক পদ্ধতি রয়েছে, যার প্রত্যেকটির নিজস্ব সুবিধা এবং অসুবিধা রয়েছে। কাজের নির্দিষ্ট প্রয়োজনীয়তা অনুযায়ী পদ্ধতি নির্বাচন করা উচিত। এই পরীক্ষাটি প্রধানত মাইক্রোস্কোপের সরাসরি গণনা পদ্ধতি চালু করে যা সাধারণত উত্পাদন এবং বৈজ্ঞানিক গবেষণার কাজে ব্যবহৃত হয়।
1. উদ্দেশ্য প্রয়োজনীয়তা
1. রক্তের কোষ গণনা বোর্ডের সাহায্যে গণনার নীতিটি স্পষ্ট করুন।
2. রক্তের কোষ গণনা বোর্ড ব্যবহার করে অণুজীব গণনার পদ্ধতি আয়ত্ত করুন।
2. মৌলিক নীতি
মাইক্রোস্কোপ ডাইরেক্ট কাউন্টিং পদ্ধতি হল একটি সহজ, দ্রুত এবং স্বজ্ঞাত পদ্ধতি যা একটি নির্দিষ্ট ক্ষেত্র এবং আয়তনের সাথে একটি বিশেষ স্লাইডে পরীক্ষা করার জন্য নমুনার অল্প পরিমাণ সাসপেনশন রাখে এবং এটি সরাসরি একটি মাইক্রোস্কোপের নীচে গণনা করে। পদ্ধতি। বর্তমানে, দেশে এবং বিদেশে সাধারণত ব্যবহৃত ব্যাকটেরিওমিটারের মধ্যে রয়েছে: হিমোসাইটোমিটার, পিটারফ-হাউসার ব্যাকটেরিওমিটার, এবং হকসলে ব্যাকটেরিওমিটার, ইত্যাদি। এগুলি সবই খামির, ব্যাকটেরিয়া, ছাঁচের স্পোর এবং অন্যান্য সাসপেনশন গণনা করতে ব্যবহার করা যেতে পারে এবং মূল নীতিগুলি একই। পরবর্তী দুটি ব্যাকটেরিয়া কাউন্টারে মোট আয়তন 0৷{4}} একটি কভার গ্লাস দিয়ে আবৃত হওয়ার পরে 2mm3, এবং কভার গ্লাস এবং স্লাইডের মধ্যে দূরত্ব মাত্র 0.02mm। অতএব, একটি তেল নিমজ্জন উদ্দেশ্য লেন্স ব্যাকটেরিয়া যেমন ছোট কোষ পর্যবেক্ষণ এবং সনাক্ত করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। গণনা এই ব্যাকটিরিওমিটারগুলি ব্যবহার করার পাশাপাশি, একটি অনুমান পদ্ধতিও রয়েছে যা একটি মাইক্রোস্কোপের নীচে ভিজ্যুয়াল ফিল্ড এলাকার সাথে স্মিয়ার এলাকার অনুপাত সরাসরি পর্যবেক্ষণ করে। এই পদ্ধতিটি সাধারণত দুধের ব্যাকটিরিওলজিকাল পরীক্ষার জন্য ব্যবহৃত হয়। অণুবীক্ষণ যন্ত্রের সরাসরি গণনা পদ্ধতির সুবিধা হল এটি স্বজ্ঞাত, দ্রুত এবং পরিচালনা করা সহজ। যাইহোক, এই পদ্ধতির অসুবিধা হল যে পরিমাপ করা ফলাফল সাধারণত মৃত ব্যাকটেরিয়া এবং জীবিত ব্যাকটেরিয়ার যোগফল। এই ঘাটতি কাটিয়ে ওঠার জন্য বর্তমানে কিছু পদ্ধতি রয়েছে, যেমন টেকসই ব্যাকটেরিয়া স্টেনিং মাইক্রোচেম্বার কালচার (স্বল্প সময়) এবং কোষ বিভাজন ইনহিবিটর যোগ করা শুধুমাত্র কার্যকর ব্যাকটেরিয়া গণনার উদ্দেশ্য অর্জনের জন্য।
এই পরীক্ষাটি একটি মাইক্রোস্কোপের অধীনে সরাসরি গণনা পরিচালনা করার জন্য একটি উদাহরণ হিসাবে একটি হিমোসাইটোমিটার ব্যবহার করে। অন্য দুটি ব্যাকটিরিওমিটার ব্যবহারের জন্য, প্রতিটি প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী পড়ুন। একটি হেমোসাইটোমিটার ব্যবহার করে একটি মাইক্রোস্কোপের অধীনে সরাসরি গণনা একটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত মাইক্রোবিয়াল গণনা পদ্ধতি। গণনা বোর্ড একটি বিশেষ স্লাইড যার চারটি খাঁজ তিনটি প্ল্যাটফর্ম গঠন করে; মাঝখানে প্রশস্ত প্ল্যাটফর্মটি একটি ছোট অনুভূমিক খাঁজ দ্বারা দুটি ভাগে বিভক্ত এবং প্ল্যাটফর্মের প্রতিটি পাশে একটি গ্রিড গ্রিড রয়েছে। প্রতিটি বর্গাকার গ্রিড নয়টি বড় স্কোয়ারে বিভক্ত, এবং মাঝখানের বড় বর্গটি হল গণনা ঘর। রক্তের কোষ গণনা বোর্ডের গঠন {{0}} চিত্রে দেখানো হয়েছে। গণনা চেম্বারের স্কেলের জন্য সাধারণত দুটি নির্দিষ্টকরণ রয়েছে। একটি হল 25টি মাঝারি বর্গক্ষেত্রে বিভক্ত একটি বড় বর্গ, এবং প্রতিটি মাঝারি বর্গক্ষেত্র 16টি ছোট বর্গক্ষেত্রে বিভক্ত (চিত্র 15-2); অন্যটি একটি বড় বর্গক্ষেত্র। বর্গাকার গ্রিডটি 16টি মাঝারি স্কোয়ারে বিভক্ত এবং প্রতিটি মাঝারি বর্গক্ষেত্র 25টি ছোট স্কোয়ারে বিভক্ত। যাইহোক, এটি যে ধরনের গণনা বোর্ডই হোক না কেন, প্রতিটি বড় বর্গক্ষেত্রে 400টি ছোট বর্গ রয়েছে৷ প্রতিটি বড় বর্গক্ষেত্রের পাশের দৈর্ঘ্য হল lmm, তারপর প্রতিটি বড় বর্গক্ষেত্রের ক্ষেত্রফল হল lmm2৷ কভার স্লিপ কভার করার পরে, কভার স্লিপ এবং স্লাইডের মধ্যে উচ্চতা 0.lmm, তাই গণনা চেম্বারের আয়তন 0.lmm3 (এক মিলিলিটারের এক দশ হাজার ভাগ)। চিত্র 15-1 রক্তের কোষ গণনা বোর্ডের কাঠামো (1) চিত্র 15-2 রক্তের কোষ গণনা বোর্ডের কাঠামো (2) A. সামনের দৃশ্য; B. অনুদৈর্ঘ্য বিভাগ; বর্ধিত বর্গাকার গ্রিড, মাঝখানে বড় বর্গক্ষেত্র হল গণনা চেম্বার 1. রক্তের কোষ গণনা বোর্ড; 2. কভার স্লিপ; 3. কাউন্টিং চেম্বারে গণনা করার সময়, সাধারণত পাঁচটি বর্গক্ষেত্রে মোট ব্যাকটেরিয়ার সংখ্যা গণনা করুন, তারপর প্রতিটি বর্গক্ষেত্রের গড় মান খুঁজুন এবং তারপর 25 বা 16 দ্বারা গুণ করুন একটি বড় বর্গক্ষেত্রে ব্যাকটেরিয়ার মোট সংখ্যা তখন রূপান্তরিত হয় ব্যাকটেরিয়া দ্রবণ 1ml ব্যাকটেরিয়া মোট সংখ্যা মধ্যে. ধরুন পাঁচটি মধ্য বর্গক্ষেত্রে ব্যাকটেরিয়ার মোট সংখ্যা হল A, এবং ব্যাকটেরিয়া দ্রবণের তরলীকরণ ফ্যাক্টর হল B। যদি এটি 25টি মধ্য বর্গক্ষেত্র বিশিষ্ট একটি গণনা প্লেট হয়, তাহলে ব্যাকটেরিয়াল দ্রবণের 1mL-এ ব্যাকটেরিয়ার মোট সংখ্যা {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (টুকরা) একইভাবে, যদি এটি 16 বর্গক্ষেত্র বিশিষ্ট একটি গণনা প্লেট হয়, ব্যাকটেরিয়া দ্রবণের 1mL মধ্যে ব্যাকটেরিয়ার মোট সংখ্যা {{ 30}A/5×16×104×B=32000A·B (টুকরা),,
