ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ এবং প্রচলিত অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের তুলনা এবং বৈশিষ্ট্য
একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ একটি সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ থেকে আলাদা। একটি প্রচলিত আলোর উত্স থেকে আলোকসজ্জার অধীনে নমুনাগুলি পর্যবেক্ষণ করার পরিবর্তে, এটি নমুনার মধ্যে ফ্লুরোসেন্ট পদার্থগুলিকে উত্তেজিত করতে একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের (সাধারণত অতিবেগুনী বা নীল-বেগুনি আলো) আলো ব্যবহার করে, যার ফলে তারা প্রতিপ্রভ নির্গত করে। অতএব, একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের আলোর উত্স সরাসরি আলোকসজ্জার জন্য পরিবেশন করে না; এটি নমুনায় অন্তঃসত্ত্বা ফ্লুরোসেন্ট পদার্থকে উত্তেজিত করার জন্য শক্তির উৎস হিসেবে কাজ করে। আমরা উৎস থেকে আলোর কারণে নমুনাটি পর্যবেক্ষণ করতে পারি, কিন্তু উত্তেজনা আলো শোষণ করার পরে নমুনায় ফ্লুরোসেন্ট পদার্থ দ্বারা নির্গত ফ্লুরোসেন্সের কারণে।
এটি অনুসরণ করে যে একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের মূল বৈশিষ্ট্য হল এর আলোক উৎস, যা পরীক্ষার নমুনায় ফ্লুরোসেন্ট পদার্থের জন্য যথেষ্ট উত্তেজনা তীব্রতা প্রদানের জন্য একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্য সীমার মধ্যে প্রচুর উত্তেজনা আলো সরবরাহ করতে পারে। এদিকে, একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ একটি সংশ্লিষ্ট ফিল্টার সিস্টেমের সাথে সজ্জিত করা আবশ্যক। ফ্লুরোসেন্স হিস্টোকেমিস্ট্রির একটি অপরিহার্য হাতিয়ার হিসেবে, এতে প্রধানত একটি অতি-উচ্চ চাপের আলোর উৎস, একটি ফিল্টার সেট (উত্তেজনা ফিল্টার এবং বাধা ফিল্টার সহ), একটি অপটিক্যাল সিস্টেম এবং একটি ফটোগ্রাফিক সিস্টেম থাকে। এটি ফ্লুরোসেন্স তৈরি করতে একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলোর সাথে উত্তেজনাপূর্ণ নমুনা দ্বারা কাজ করে।
ফ্লুরোসেন্স উত্তেজনা পদ্ধতি: UV উত্তেজনা (অতিবেগুনী আলোকসজ্জা পদ্ধতি) এবং BV উত্তেজনা (নীল-বেগুনি আলো পদ্ধতি) মধ্যে তরঙ্গদৈর্ঘ্য পরিসীমা দ্বারা শ্রেণীবদ্ধ করা হয়। অতিবেগুনী উত্তেজনা উত্তেজনার জন্য 400 এনএম এর চেয়ে ছোট কাছাকাছি অতিবেগুনী আলো ব্যবহার করে। কোন দৃশ্যমান উত্তেজনা আলো জড়িত নয়, তাই পর্যবেক্ষণ করা ফ্লুরোসেন্স রঞ্জকের অন্তর্নিহিত ফ্লুরোসেন্স দেখায়। এটি ব্যাকগ্রাউন্ড টিস্যুর অটোফ্লোরোসেন্স থেকে নমুনার উপর নির্দিষ্ট প্রতিপ্রভাকে আলাদা করা সহজ করে তোলে।
BV উত্তেজনা পদ্ধতি: 404 nm এবং 434 nm কেন্দ্রিক অতিবেগুনী থেকে নীল আলো পর্যন্ত আলো দিয়ে উত্তেজনা করা হয়। যেহেতু নীল আলো এই পদ্ধতিতে নমুনাকে বিকিরণ করে, তাই ফ্লুরোসেন্স পর্যবেক্ষণ সিস্টেমের কাট-অফ ফিল্টারটি প্রয়োজনীয় সবুজ এবং হলুদ ফ্লুরোসেন্স সম্পূর্ণরূপে প্রেরণ করার সময় নীল আলোকে সম্পূর্ণরূপে অবরুদ্ধ করতে হবে। এই পদ্ধতিটি ফ্লুরোসেন্ট অ্যান্টিবডি কৌশলগুলিতে ব্যবহৃত ফ্লুরোক্রোমগুলিতে প্রয়োগ করা হয়। উত্তেজনা আলোর সর্বাধিক শোষণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য এবং ফ্লুরোসেন্সের সর্বাধিক নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্য তুলনামূলকভাবে কাছাকাছি, তাই BV উত্তেজনার জন্য তীক্ষ্ণ-কাট ফিল্টার প্রয়োজন। নীল আলো এখানে উত্তেজনা আলো হিসাবে ব্যবহার করা হয়, যা ফ্লুরোক্রোমের উচ্চ শোষণ দক্ষতা নিয়ে আসে এবং উজ্জ্বল ছবি দেয়। এর অসুবিধা হল যে 500 এনএম-এর নীচে ফ্লুরোসেন্স সনাক্ত করা যায় না এবং 500 এনএম-এর উপরে সংকেতগুলি পুরো ছবিটিকে একটি হলুদ আভা দেয়৷ ফ্লুরোসেন্ট অ্যান্টিবডি অ্যাসে, নির্দিষ্টতা বেশিরভাগই ফ্লুরোক্রোমের চরিত্রগত রঙ দ্বারা বিচার করা হয়। অতএব, সূক্ষ্ম নির্দিষ্টতা মূল্যায়ন করার সময়, BV উত্তেজনা পদ্ধতির উপরোক্ত অসুবিধা একটি উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলতে পারে।
