টিস্যু ব্লকের আয়তনের সাথে বায়োমাইক্রোস্কোপি
জৈবিক মাইক্রোস্কোপি এখন পর্যন্ত, টিস্যু এবং কোষের এক্স-রে মাইক্রোসেকশনের জন্য কোল্ড ফিক্সেশন, হিমায়িত আল্ট্রাথিন সেকশন এবং ফ্রিজ-ড্রাইং রুটিন পদ্ধতি। এই পদ্ধতির বিশদ বিবরণ নিম্নরূপ ব্যাখ্যা করা হয়েছে:
একটি কনডেন্সার সহ জৈবিক অণুবীক্ষণ যন্ত্রের জন্য, উজ্জ্বলতা মাঝারি করার জন্য কনডেন্সারকে উপরে এবং নীচে সরানো যেতে পারে এবং পরিবর্তনশীল আলোর অ্যাপারচারটিও একটি মাঝারি 9b উজ্জ্বলতা অর্জন করতে পরিবর্তন করা যেতে পারে। আলো রৌদ্রজ্জ্বল হলে, কনডেন্সার যথাযথভাবে উপরে উঠতে পারে এবং পরিবর্তনশীল আলোর উৎসের অ্যাপারচার যথাযথভাবে বড় করা যেতে পারে। আলো খুব শক্তিশালী হলে, কনডেন্সার লেন্স যথাযথভাবে কমানো যেতে পারে, এবং ছেদকারী আলোর অ্যাপারচার যথাযথভাবে হ্রাস করা যেতে পারে। আপনি যদি এখনও এই ক্ষেত্রে চমকপ্রদ বোধ করেন তবে আপনি একটি উপযুক্ত ফিল্টার চয়ন করতে পারেন এবং এটি কনডেনসারের নীচে বন্ধনীতে রাখতে পারেন। এই ওক আপনাকে সন্তুষ্ট করে এমন উজ্জ্বলতা পেতে সক্ষম হবে। অবশ্যই, কনডেনসারের উপরের এবং নীচের অবস্থানগুলি সামঞ্জস্য করা, পরিবর্তনশীল অপটিক্যাল রিডিংয়ের অ্যাপারচারের আকার সামঞ্জস্য করা এবং একটি উপযুক্ত ফিল্টার নির্বাচন করার জন্য অভিজ্ঞতা অর্জনের জন্য একটি নির্দিষ্ট সময়ের অনুশীলন প্রয়োজন।
জৈবিক অণুবীক্ষণ যন্ত্রের একটি অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ বিষয় হল কোষের নমুনা এবং পৃথকীকরণের প্রক্রিয়ায়, ফ্রিজ-ড্রাইং এবং রজন এম্বেডিং (এফডি), অতি-পাতলা সমষ্টিকে হিমায়িত করার পরে এবং হিমায়িত-শুকানোর পরে, প্রতিটি অংশে 65টি উপাদানের সামগ্রী। সাবধানে পরিচালনা করা আবশ্যক। বিশ্লেষণ করা কোষ ক্ষতিগ্রস্ত হতে পারে না. কারণ এক্স-রে মাইক্রোঅ্যানালাইসিসে শুধু অনেকগুলো ধাপই জড়িত নয়, অনেক খরচও হয়। দীর্ঘ সময় এবং বহু-পদক্ষেপ প্রক্রিয়াকরণের পরে যদি বিশ্লেষণ করা কোষগুলি ক্ষতিগ্রস্ত কোষ বা মৃত কোষ হয়, তবে ভুল সিদ্ধান্তে আঁকতে খুবই দুঃখজনক। উদাহরণস্বরূপ, কোলাজেনেস চিকিত্সা দ্বারা পৃথক করা কার্ডিওমায়োসাইটগুলির দুটি আকার রয়েছে, একটি লম্বা রড-আকৃতির এবং অন্যটি গোলাকার। পরেরটি হল মৃত কোষ যা কোষ বিচ্ছিন্নতার সময় ক্ষতিগ্রস্ত হয়।
বায়োমাইক্রোস্কোপি এই দুই ধরনের কোষে ইলেক্ট্রোলাইটের পরিমাণ এবং বন্টন বেশ ভিন্ন। বৃত্তাকার কার্ডিওমায়োসাইটগুলিতে Na খুব বেশি এবং K খুব কম, এবং নেমাটোডে ca-এর ঘনত্ব খুব বেশি। অন্যান্য বিশ্লেষণ পদ্ধতির সাথে পরীক্ষা করার পরে, এটি প্রমাণিত হয় যে গোলাকার কোষগুলির উচ্চ Na এবং নিম্ন K এবং মাইটোকন্ড্রিয়াতে উচ্চ Ca কোষ বিচ্ছেদ প্রক্রিয়া চলাকালীন কোষের ঝিল্লির ক্ষতির কারণে। কোষ এবং টিস্যুগুলির বরফ-ঠান্ডা স্থিরকরণ পদ্ধতি হল সাধারণত প্রথমে নিভিয়ে ফেলা এবং স্থিরকরণ, এবং তারপরে তরল নাইট্রোজেনে সংরক্ষণ করা। সংরক্ষণের প্রভাবের জন্য স্থির নির্গমন অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। জীবন্ত কোষ বা তাজা টিস্যুতে প্রচুর পরিমাণে পানি থাকে। নিভানোর সময়, কোষ বা টিস্যুগুলির যে অংশগুলি চূর্ণ রেফ্রিজারেন্টের সাথে সরাসরি সংস্পর্শে থাকে (বিশেষত তরল নাইট্রোজেন দিয়ে নিভানোর সময়) প্রায়শই হিমায়িত হয় এবং প্রথমে স্থির হয়, এইভাবে একটি "শেল" গঠন করে, যা কোষের কেন্দ্রীয় অংশগুলিকে বাধা দেয়। চূর্ণ এবং ঠান্ডা স্থির. অতএব, এক্স-লাইন মাইক্রো-এরিয়া বিশ্লেষণ করার সময়, এটি প্রায়শই পাওয়া যায় যে বড় কোষগুলির কেন্দ্রে বরফের স্ফটিক রয়েছে। এটি যাতে না ঘটে তার জন্য, তরল নাইট্রোজেনের গলনাঙ্কের চেয়ে বেশি কিন্তু 806c এর চেয়ে কম এমন একটি পদার্থকে ভাঙ্গা রেফ্রিজারেন্ট হিসাবে ব্যবহার করা হয়। এরকম অনেক পদার্থ আছে, কিন্তু সবচেয়ে সস্তা হল ঘনীভূত প্রোপেন (স্ফুটনাঙ্ক - 42.120c, গলনাঙ্ক - 187.10c, আণবিক ওজন 44.1), এবং শীতল করার গতি সবচেয়ে দ্রুত। কিন্তু এর অসুবিধা হল এটি দাহ্য।
জৈবিক অণুবীক্ষণ যন্ত্র পেশী ফাইবারকে একটি বিশেষ র্যাকে রাখতে পারে, যাতে পেশী ফাইবার সংকোচন একটি নির্দিষ্ট পর্যায়ে পৌঁছায় এবং ঠিক করার প্রয়োজন হয়, অবিলম্বে পেশী ফাইবারে তরল প্রোপেন স্প্রে করার জন্য অগ্রভাগটি শুরু করুন এবং এটি ঠিক করুন। তারপর ফ্রেমের সাথে পেশীর তন্তুগুলো বের করে তরল নাইট্রোজেনে রাখা হয়। যদি রক্তকণিকা বা বিচ্ছিন্ন কোষগুলিকে ঠিক করা হয়, প্রথমে কম গতিতে সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে কোষগুলিকে কেন্দ্রীভূত করুন, কোষগুলিকে ভাল তাপ পরিবাহিতা সহ একটি রূপালী শিশিতে স্থানান্তর করুন, শিশিটিকে তরল প্রোপেনে রাখুন এবং স্থির করার জন্য হিমায়িত করুন। হলের পরীক্ষাগারে ইঁদুরের অগ্ন্যাশয় ঠিক করার সময়, দুটি ইস্পাত ব্লককে তরল হিলিয়াম (বা তরল নাইট্রোজেন) দিয়ে প্রি-কুল করা হয়েছিল এবং দুটি তামার ব্লককে ফোর্সেপ দিয়ে আটকে দেওয়া হয়েছিল এবং অগ্ন্যাশয়ের সামনে এবং পিছনে স্থাপন করা হয়েছিল যাতে নিভিয়ে ফেলা হয়। অগ্ন্যাশয় টিস্যু বা কোষগুলিকে তরল নাইট্রোজেনে সংরক্ষণ করা যেতে পারে দীর্ঘমেয়াদী সঞ্চয়স্থানের জন্য নির্গমন এবং ফিক্সিংয়ের পরে।
জৈবিক মাইক্রোস্কোপি সবচেয়ে সম্মানিত হিমায়িত আল্ট্রাথিন বিভাগ পদ্ধতি ছাড়াও, এখানে বিজ্ঞানীদের দ্বারা ব্যবহৃত আরেকটি জমা কৌশল রয়েছে। বিশ্লেষণের আগে এটিকে স্থির করার জন্য উপাদানটির সাথে একটি পলল তৈরি করার জন্য একটি পদার্থ যোগ করা হয় এবং পললটি বিশ্লেষণ করা হয়। উদাহরণস্বরূপ, লোকেরা প্রায়শই পেশী কোষগুলিতে ca জমা করতে অক্সালেট এবং পাইরোঅ্যান্টিমোনেট ব্যবহার করে। আগেরটি সাইটোপ্লাজমে Ca-এর কম ঘনত্বের জন্য যথেষ্ট সংবেদনশীল নয়; pyroantimonate বেশি সংবেদনশীল এবং মস্তিষ্কে বিনামূল্যে Ca সহ ইলেকট্রন-ঘন জমা তৈরি করতে পারে, কিন্তু পাইরোঅ্যান্টিমোনেট সোডিয়ামের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ নয়, ম্যাঙ্গানিজ, বেরিয়াম, আয়রন জমাও গঠিত হয় এবং কম নির্দিষ্ট। নমুনা প্রস্তুতির প্রক্রিয়াটি সাধারণ ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ আল্ট্রাথিন বিভাগের নমুনাগুলির প্রস্তুতির অনুরূপ, পার্থক্য হল 3 শতাংশ পটাসিয়াম পাইরোঅ্যান্টিমোনেট (ফসফেট বাফার স্যালাইন, পিএইচ 7.6) ফিক্সেশনের 6 ঘন্টা আগে এবং দাগযুক্ত পেশী আলট্রাথিন বিভাগগুলিতে, প্রতিটি সারকোমেরের A এবং 2 ব্যান্ডের মধ্যরেখায় কালো আমানত দেখা গেছে এবং এক্স-রে মাইক্রোঅ্যানালাইসিসের জন্য দাগহীন বিভাগগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল। ডায়ামিনোবেঞ্জিডাইন টেট্রাহাইড্রোক্লোরাইড (ডিএবি) হিম-ধারণকারী পদার্থগুলিকে প্রস্রাব করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। হিস্টোকেমিক্যাল রেসিপিটেশন রিঅ্যাকশন এবং এক্স-রে মাইক্রো-ডিফারেনটিয়েশন ব্রিজের সংমিশ্রণটি পরীক্ষাগারগুলিতে বিবেচনা করা যেতে পারে যেগুলিতে হিমায়িত আল্ট্রাথিন বিভাগের অবস্থা নেই। অর্ধ-পরিমাণ বিশ্লেষণ করা উপাদানগুলির সর্বোচ্চ উচ্চতা অনুযায়ী করা যেতে পারে
