ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে জৈবিক নমুনা প্রস্তুতি এবং পর্যবেক্ষণ

ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে জৈবিক নমুনা প্রস্তুতি এবং পর্যবেক্ষণ

একটি মাইক্রোস্কোপের রেজোলিউশন ব্যবহৃত আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্যের উপর নির্ভর করে। ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ, যা 1933 সালে আবির্ভূত হয়েছিল, তার আলোর উত্স হিসাবে দৃশ্যমান আলোর চেয়ে অনেক ছোট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের ইলেক্ট্রন বিমগুলিকে নিয়োগ করে। এটি অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের তুলনায় এর রেজোলিউশনকে ব্যাপকভাবে উন্নত করে। আলোর উত্সের পার্থক্যগুলি ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ এবং অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের মধ্যে পার্থক্যের একটি সিরিজের দিকে পরিচালিত করে।

ইলেক্ট্রন রশ্মি ইমেজিং নীতির পার্থক্যের উপর ভিত্তি করে এবং নমুনার সাথে মরীচি যেভাবে মিথস্ক্রিয়া করে, আধুনিক ইলেক্ট্রন অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি অনেক প্রকারে বিবর্তিত হয়েছে। সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত হয় ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ (TEM) এবং স্ক্যানিং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ (SEM)। TEM-এর মোট বিবর্ধন 1000 থেকে 1,000,000 বার পর্যন্ত হতে পারে, যখন SEM-এর রেঞ্জ 20 থেকে 300,000 বার। এই পরীক্ষাটি মূলত ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ এবং স্ক্যানিং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের জন্য নমুনা প্রস্তুতির প্রবর্তন করে।

২. যন্ত্রপাতি এবং উপকরণ

স্ট্রেন:Escherichia coliতির্যক সংস্কৃতি

সমাধান এবং বিকারক: ফর্মভার, ঘনীভূত সালফিউরিক অ্যাসিড, পরম ইথানল, জীবাণুমুক্ত জল, 2% জলীয় সোডিয়াম ফসফোটাংস্টেট দ্রবণ (pH 6.5–8.0), 0.3% পলিভিনাইল ফর্মাল দ্রবণ (ক্লোরোফর্মে দ্রবীভূত), সাইটোক্রোম সি, অ্যামোনিয়াম p23, অ্যামোনিয়াম অ্যাসিড।

যন্ত্র এবং সরবরাহ: প্রচলিত অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ, কপার গ্রিড, বুচনার ফানেল, বীকার, পেট্রি ডিশ, জীবাণুমুক্ত ড্রপার, জীবাণুমুক্ত ফোর্সেপস, বিচ্ছেদকারী সুই, গ্লাস স্লাইড, হিমোসাইটোমিটার, ভ্যাকুয়াম ইভাপোরেটর, ক্রিটিক্যাল-পয়েন্ট ড্রায়ার ইত্যাদি।

III. অপারেটিং পদ্ধতি

(1) ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপির জন্য নমুনা প্রস্তুতি এবং পর্যবেক্ষণ

ধাতব গ্রিডের চিকিৎসা অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপির নমুনা কাচের স্লাইডে দেখা যায়। যাইহোক, ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপির জন্য, ইলেক্ট্রনগুলি কাঁচে প্রবেশ করতে পারে না, তাই জাল সাবস্ট্রেটগুলি, যা সাধারণত নমুনা গ্রিড হিসাবে পরিচিত, পরিবর্তে ব্যবহার করা হয়। নমুনা গ্রিড উপাদান এবং আকৃতি অনুযায়ী বিভিন্ন স্পেসিফিকেশন পাওয়া যায়. 200-400 জালের কপার গ্রিড সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত হয়। কপার গ্রিডগুলি দূষক অপসারণের জন্য ব্যবহারের আগে অবশ্যই পরিষ্কার করা উচিত, অন্যথায় সাপোর্টিং ফিল্মের গুণমান এবং নমুনা মাইক্রোগ্রাফের স্বচ্ছতা প্রভাবিত হবে। এই পরীক্ষাটি 400-জালের তামার গ্রিড গ্রহণ করে, নিম্নরূপ চিকিত্সা করা হয়: প্রথমে ফর্মভার দ্রবণে কয়েক ঘন্টা ভিজিয়ে রাখুন, পাতিত জল দিয়ে বারবার ধুয়ে ফেলুন, তারপর পরম ইথানলে ভিজিয়ে ডিহাইড্রেট করুন। উপরের ধাপের পরেও যদি গ্রিডগুলি নোংরা থেকে যায়, তবে সেগুলিকে 1-2 মিনিটের জন্য মিশ্রিত ঘনীভূত সালফিউরিক অ্যাসিডে (1:1) ভিজিয়ে রাখুন, অথবা 1% NaOH দ্রবণে কয়েক মিনিটের জন্য সেদ্ধ করুন। পাতিত জল দিয়ে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে ধুয়ে ফেলুন, পরম ইথানলে ডিহাইড্রেট করুন এবং পরে ব্যবহারের জন্য আলাদা করে রাখুন।