লেজার-স্ক্যানিং মাল্টিফোটন মাইক্রোস্কোপের জন্য উন্নতির সুবিধা
লেজার-স্ক্যানিং মাল্টিফোটন মাইক্রোস্কোপ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপিতে একটি বড় অগ্রগতির প্রতিনিধিত্ব করে। তারা প্রধানত জীবিত কোষ, স্থির কোষ এবং টিস্যুগুলির গভীর কাঠামো পর্যবেক্ষণ করতে এবং তীক্ষ্ণ, পরিষ্কার মাল্টি-লেয়ার জেড-প্লেন কাঠামো, যেমন অপটিক্যাল বিভাগগুলি অর্জন করতে সক্ষম, যা নমুনার ত্রিমাত্রিক কঠিন কাঠামো পুনর্গঠন করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।
একটি কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ একটি লেজার আলোর উত্স ব্যবহার করে। প্রসারিত লেজার রশ্মি অবজেক্টিভ লেন্সের পুরো পিছনের ফোকাল প্লেনটি পূরণ করে এবং তারপরে নমুনার ফোকাল প্লেনে একটি অত্যন্ত ছোট জায়গায় একত্রিত হতে উদ্দেশ্য লেন্স সিস্টেমের মধ্য দিয়ে যায়। অবজেক্টিভ লেন্সের সাংখ্যিক ছিদ্রের উপর নির্ভর করে, আলোকিত স্থানটির ব্যাস প্রায় 0.25-0.8 μm, যার গভীরতা প্রায় 0.5-1.5 μm। কনফোকাল স্পটটির আকার মাইক্রোস্কোপ ডিজাইন, লেজার তরঙ্গদৈর্ঘ্য, উদ্দেশ্য বৈশিষ্ট্য, স্ক্যানিং ইউনিট প্যারামিটার সেটিংস এবং নমুনা বৈশিষ্ট্য দ্বারা নির্ধারিত হয়।
ওয়াইডফিল্ড অণুবীক্ষণ যন্ত্রে একটি বৃহৎ আলোক ক্ষেত্র এবং গভীর আলোকসজ্জার গভীরতা রয়েছে, যখন কনফোকাল মাইক্রোস্কোপের আলোকসজ্জা ফোকাল সমতলে একটি ক্ষুদ্র ফোকাল পয়েন্টে কেন্দ্রীভূত হয়। কনফোকাল অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মৌলিক সুবিধা হল যে তারা পুরু ফ্লুরোসেন্ট নমুনাগুলিতে (50 μm পর্যন্ত বা পুরু) সূক্ষ্ম অপটিক্যাল সেকশনিং করতে পারে, যার সেকশন পুরুত্ব 0.5 থেকে 1.5 μm পর্যন্ত। মাইক্রোস্কোপ জেড-অক্ষ স্টেপিং মোটরের মাধ্যমে নমুনাটিকে উল্লম্বভাবে সরানোর মাধ্যমে অপটিক্যাল বিভাগের চিত্রগুলির একটি সিরিজ প্রাপ্ত করা যেতে পারে। চিত্র অধিগ্রহণ নির্বাচিত সমতলে সীমাবদ্ধ এবং নমুনার অন্যান্য অঞ্চল থেকে নির্গত সংকেত দ্বারা বিরক্ত হবে না। ব্যাকগ্রাউন্ড ফ্লুরোসেন্স বাদ দেওয়ার পরে এবং সংকেত-থেকে-শব্দের অনুপাত উন্নত করার পরে, কনফোকাল চিত্রগুলি প্রচলিত ওয়াইডফিল্ড ফ্লুরোসেন্স চিত্রগুলির তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে উচ্চতর বৈসাদৃশ্য এবং রেজোলিউশন প্রদর্শন করে।
অনেক নমুনায়, জটিল সিস্টেম গঠনের জন্য অসংখ্য জটিল কাঠামোগত উপাদানগুলি আন্তঃপ্রবেশ করে। একবার পর্যাপ্ত অপটিক্যাল বিভাগের ছবি অর্জিত হলে, সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে ত্রিমাত্রিক পুনর্গঠন করা যেতে পারে। এই পরীক্ষামূলক পদ্ধতিটি কোষ বা টিস্যুর মধ্যে জটিল কাঠামোগত এবং কার্যকরী সম্পর্ক ব্যাখ্যা করার জন্য জৈবিক গবেষণায় ব্যাপকভাবে প্রয়োগ করা হয়েছে।
