কনফোকাল ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির একটি কার্যকরী জ্ঞান
কনফোকাল ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির মূল নীতি: ফোকাল প্লেনে একটি ছোট, সু-সংজ্ঞায়িত আলোর জায়গা তৈরি করতে নমুনাকে আলোকিত করতে একটি বিন্দু আলোর উত্স ব্যবহার করুন। আলোকিত হওয়ার পর স্পট দ্বারা নির্গত ফ্লুরোসেন্স বস্তুনিষ্ঠ লেন্স দ্বারা সংগ্রহ করা হয় এবং মূল আলোকিত আলোর পথ ধরে ডাইক্রোয়িক আয়নায় ফিরে আসে। একটি মরীচি splitter গঠন. স্পেকট্রোমিটার ফ্লুরোসেন্স সরাসরি ডিটেক্টরে পাঠায়। আলোর উৎস এবং ডিটেক্টরের সামনে একটি পিনহোল রয়েছে, যাকে যথাক্রমে আলোকসজ্জা পিনহোল এবং সনাক্তকরণ পিনহোল বলা হয়। দুটির জ্যামিতিক মাত্রা সামঞ্জস্যপূর্ণ, প্রায় 100-200nm; ফোকাল সমতলে আলোক বিন্দুর সাপেক্ষে, দুটি সংযোজিত, অর্থাৎ আলোক বিন্দুটি লেন্সের একটি সিরিজের মধ্য দিয়ে যায় এবং শেষ পর্যন্ত একই সময়ে আলোকসজ্জা পিনহোল এবং সনাক্তকরণ পিনহোলের উপর ফোকাস করা যেতে পারে। এইভাবে, ফোকাল সমতল থেকে আলো সনাক্তকরণ গর্তের সীমার মধ্যে ঘনীভূত হতে পারে, যখন ফোকাল প্লেনের উপরে বা নীচে থেকে বিক্ষিপ্ত আলো সনাক্তকরণ গর্তের বাইরে অবরুদ্ধ থাকে এবং চিত্রিত করা যায় না। নমুনাটি লেজারের সাহায্যে পয়েন্ট বাই পয়েন্ট স্ক্যান করা হয় এবং ডিটেকশন পিনহোলের পিছনে থাকা ফটোমাল্টিপ্লায়ার টিউবটিও বিন্দুতে সংশ্লিষ্ট আলোক বিন্দুর কনফোকাল ইমেজ পায়, যা একটি ডিজিটাল সিগন্যালে রূপান্তরিত হয় এবং কম্পিউটারে প্রেরণ করা হয় এবং অবশেষে একত্রিত হয়। পুরো ফোকাল প্লেনের একটি পরিষ্কার কনফোকাল ইমেজে পর্দা। .
প্রতিটি ফোকাল সমতল চিত্র আসলে নমুনার একটি অপটিক্যাল ক্রস-সেকশন। এই অপটিক্যাল ক্রস-সেকশনের সবসময় একটি নির্দিষ্ট বেধ থাকে এবং একে অপটিক্যাল থিন সেকশনও বলা হয়। যেহেতু ফোকাসে আলোর তীব্রতা অ-ফোকাসের আলোর তীব্রতার চেয়ে অনেক বেশি, এবং নন-ফোকাল সমতল আলো পিনহোল দ্বারা ফিল্টার করা হয়, কনফোকাল সিস্টেমের ক্ষেত্রের গভীরতা প্রায় শূন্য। Z-অক্ষের দিক বরাবর স্ক্যান করা অপটিক্যাল টমোগ্রাফি উপলব্ধি করতে পারে, কাঙ্খিত গঠন করে নমুনার ফোকাসকৃত স্থানে দ্বি-মাত্রিক অপটিক্যাল বিভাগটি পর্যবেক্ষণ করুন। XY সমতল (ফোকাল প্লেন) স্ক্যানিংকে Z-অক্ষ (অপটিক্যাল অক্ষ) স্ক্যানিংয়ের সাথে একত্রিত করে, দ্বি-মাত্রিক চিত্রগুলির ক্রমাগত স্তর জমা করে এবং বিশেষ কম্পিউটার সফ্টওয়্যার দিয়ে সেগুলি প্রক্রিয়াকরণ করে, নমুনার একটি ত্রিমাত্রিক চিত্র পাওয়া যেতে পারে।
অর্থাৎ, সনাক্তকরণ পিনহোল এবং আলোর উত্স পিনহোল সর্বদা একই বিন্দুতে ফোকাস করা হয়, যাতে ফোকাস সমতলের বাইরে উত্তেজিত ফ্লুরোসেন্স সনাক্তকরণ পিনহোলে প্রবেশ করতে না পারে।
লেজার কনফোকালের কাজের নীতির সহজ অভিব্যক্তি হল যে এটি আলোর উত্স হিসাবে লেজার ব্যবহার করে। ঐতিহ্যগত ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ইমেজিংয়ের ভিত্তিতে, একটি লেজার স্ক্যানিং ডিভাইস এবং একটি কনজুগেট ফোকাসিং ডিভাইস যোগ করা হয় এবং ডিজিটাল ছবি সংগ্রহ ও প্রক্রিয়া করার জন্য সিস্টেমটি একটি কম্পিউটার দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়।
