বেশ কিছু বিশেষ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ এবং তাদের পার্থক্য
1 অন্ধকার ক্ষেত্রের মাইক্রোস্কোপ
অন্ধকার ক্ষেত্রের অণুবীক্ষণ যন্ত্রের বস্তুর অভ্যন্তরে সূক্ষ্ম গঠন পর্যবেক্ষণ করার কাজ নেই, তবে এটি 0.004 μm এর উপরে কণার অস্তিত্ব এবং গতিবিধিকে আলাদা করতে পারে। অতএব, এটি প্রায়শই জীবিত কোষের গঠন এবং অন্তঃকোষীয় কণার গতিবিধি পর্যবেক্ষণ করতে ব্যবহৃত হয়।
অন্ধকার ক্ষেত্রের মাইক্রোস্কোপির মূল নীতি হল টিন্ডাল প্রভাব। যখন আলোর রশ্মি একটি অন্ধকার ঘরের মধ্য দিয়ে যায়, তখন বাতাসে একটি উজ্জ্বল ধূলিকণা "পথ" ঘটনা আলোর লম্ব দিক থেকে লক্ষ্য করা যায়। এই ঘটনাটি হল Tyndall প্রভাব।
অন্ধকার ক্ষেত্র মাইক্রোস্কোপ একটি সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপে একটি অন্ধকার ক্ষেত্র কনডেন্সার দ্বারা প্রতিস্থাপিত হওয়ার পরে, কনডেনসারের অভ্যন্তরীণ প্যারাবোলিক কাঠামোর আবদ্ধতার কারণে, পরিদর্শন করা বস্তুর পৃষ্ঠে বিকিরণিত আলো সরাসরি উদ্দেশ্য লেন্সে প্রবেশ করতে পারে না এবং আইপিস, এবং শুধুমাত্র বিক্ষিপ্ত আলোর মধ্য দিয়ে যেতে পারে, তাই দেখার ক্ষেত্রটি অন্ধকার।
ডার্কফিল্ড মাইক্রোস্কোপির মৌলিক ব্যবহার নিম্নরূপ:
1. একটি অন্ধকার ক্ষেত্রের কনডেন্সার ইনস্টল করুন (অথবা একটি হালকা ঢাল তৈরি করতে একটি ঘন কালো কাগজ ব্যবহার করুন এবং অন্ধকার ক্ষেত্রের প্রভাবগুলি পেতে একটি সাধারণ মাইক্রোস্কোপের কনডেন্সারের নীচে রাখুন)।
2. একটি শক্তিশালী আলোর উত্স চয়ন করুন, সাধারণত একটি মাইক্রোস্কোপ আলো সহ সরাসরি আলোকে উদ্দেশ্যমূলক লেন্সে প্রবেশ করা থেকে বিরত রাখতে।
3. কনডেন্সার এবং কাচের স্লাইডের মধ্যে সিডার তেলের একটি ফোঁটা যোগ করুন যাতে কনডেন্সারে আলোকিত আলোর সম্পূর্ণ প্রতিফলন না হয়, পরিদর্শনের জন্য বস্তুতে পৌঁছাতে ব্যর্থ হয় এবং অন্ধকার ক্ষেত্রের আলোকসজ্জা।
4. কেন্দ্র সমন্বয় সম্পাদন করুন, অর্থাৎ, কনডেন্সারকে অনুভূমিকভাবে সরান যাতে কনডেন্সারের অপটিক্যাল অক্ষ এবং মাইক্রোস্কোপের অপটিক্যাল অক্ষ কঠোরভাবে একটি সরল রেখায় থাকে। কনডেন্সারটি তুলুন এবং কম করুন, কনডেনসারের কেন্দ্রবিন্দুকে (চিত্র 1-2-এ শঙ্কু রশ্মির শীর্ষ) পরীক্ষা করা বস্তুর সাথে সারিবদ্ধ করুন।
5. কনডেনসারের সাথে সম্পর্কিত উদ্দেশ্যমূলক লেন্স নির্বাচন করুন, ফোকাল দৈর্ঘ্য সামঞ্জস্য করুন এবং সাধারণ মাইক্রোস্কোপের পদ্ধতি অনুসারে কাজ করুন।
স্টেরিওমাইক্রোস্কোপ
স্টেরিও মাইক্রোস্কোপ, সলিড মাইক্রোস্কোপ বা ব্যবচ্ছেদকারী আয়না নামেও পরিচিত, একটি খাড়া ত্রিমাত্রিক স্পেস ইমেজ ইমেজ করে এবং শক্তিশালী স্টেরিওস্কোপিক প্রভাব, পরিষ্কার এবং প্রশস্ত ইমেজিং, দীর্ঘ কাজের দূরত্ব (সাধারণত 110 মিমি) এবং ক্রমাগত বর্ধিতকরণ দেখার বৈশিষ্ট্য রয়েছে। প্রায়শই ব্যবচ্ছেদের সময় রিয়েল-টাইম পর্যবেক্ষণের জন্য জীববিজ্ঞানে ব্যবহৃত হয়
একটি সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের আলোর উৎস সমান্তরাল আলো, তাই এটি একটি দ্বি-মাত্রিক সমতল চিত্র তৈরি করে; যখন একটি স্টেরিও মাইক্রোস্কোপ একটি দ্বৈত-চ্যানেল অপটিক্যাল পথ গ্রহণ করে, এবং বাইনোকুলার টিউবের বাম এবং ডান রশ্মিগুলির একটি নির্দিষ্ট দৃষ্টিকোণ থাকে (সাধারণত 12o15o), তাই এটি করতে পারে ত্রিমাত্রিক স্থানে একটি স্টেরিওস্কোপিক চিত্র তৈরি হয়।
স্টেরিও অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি সাধারণ হালকা অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মতোই ব্যবহার করা হয়, তবে আরও সুবিধাজনক। দুটির মধ্যে প্রধান পার্থক্য হল:
1. স্টেরিও অণুবীক্ষণ যন্ত্রের পরিদর্শন বস্তুগুলিকে স্লাইড বানানোর প্রয়োজন নেই।
2. স্টেরিও মাইক্রোস্কোপের পর্যায়টি মিরর বেসে সরাসরি স্থির করা হয়েছে, এবং কালো এবং সাদা ডাবল-পার্শ্বযুক্ত প্যানেল বা গ্লাস প্যানেল দিয়ে সজ্জিত, এবং অপারেটর মাইক্রোস্কোপ পরিদর্শনের বস্তু এবং প্রয়োজনীয়তা অনুযায়ী চয়ন করতে পারে।
3. স্টেরিও মাইক্রোস্কোপের ইমেজিং খাড়া, যা ব্যবচ্ছেদ অপারেশনের জন্য সুবিধাজনক।
4. স্টেরিও মাইক্রোস্কোপের শুধুমাত্র একটি অবজেক্টিভ লেন্স আছে এবং এর ম্যাগনিফিকেশন ক্রমাগত অ্যাডজাস্টিং স্ক্রু ঘোরানোর মাধ্যমে সামঞ্জস্য করা যায়।
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি অন্তঃকোষীয় পদার্থ দ্বারা নির্গত ফ্লুরোসেন্স তীব্রতার উপর গুণগত এবং পরিমাণগত গবেষণার জন্য একটি অপটিক্যাল টুল।
কোষে দুই ধরনের ফ্লুরোসেন্ট পদার্থ রয়েছে, একটি অতিবেগুনি রশ্মি যেমন ক্লোরোফিল ইত্যাদি দ্বারা বিকিরণ করার পরে সরাসরি প্রতিপ্রভ হতে পারে; অন্যান্য পদার্থের এই বৈশিষ্ট্য নেই, তবে নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক বা ফ্লুরোসেন্ট অ্যান্টিবডি দিয়ে দাগ থাকলে, তারা অতিবেগুনী রশ্মির দ্বারা প্রতিপ্রভ হতে পারে। এছাড়াও বিকিরণ পরে প্রতিপ্রভ হতে পারে
খাড়া বায়োলুমিনেসেন্স মাইক্রোস্কোপ/উল্টানো বায়োলুমিনেসেন্স মাইক্রোস্কোপ
ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের নীতি হল ফিল্টার সিস্টেমের মাধ্যমে একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের (যেমন অতিবেগুনী আলো 3650λ বা বেগুনি-নীল আলো 4200λ) আলো নির্গত করার জন্য উচ্চ আলোক দক্ষতার (যেমন অতি-উচ্চ চাপ পারদ বাতি) একটি বিন্দু আলোর উত্স ব্যবহার করা। নমুনায় ফ্লুরোসেন্ট পদার্থকে উত্তেজিত করার জন্য উত্তেজনা আলো হিসাবে। বিভিন্ন রঙের ফ্লুরোসেন্স নির্গত হওয়ার পরে, এটি অবজেক্টিভ লেন্সের পিছনে ব্লকিং (বা দমনকারী) ফিল্টার দ্বারা ফিল্টার করা হয় এবং তারপর আইপিসের বিবর্ধনের মাধ্যমে পর্যবেক্ষণ করা হয়।
ব্লকিং ফিল্টারের দুটি কাজ রয়েছে: একটি হল উত্তেজনা আলোকে আইপিসে প্রবেশ করা থেকে শুষে নেওয়া এবং ব্লক করা যাতে ফ্লুরোসেন্স বিরক্ত না হয় এবং চোখের ক্ষতি না হয়; অন্যটি হল একটি নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্টকে নির্বাচন করা এবং একটি নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্ট রঙ দেখানোর মধ্য দিয়ে যেতে দেওয়া।
অপটিক্যাল পাথের নীতি অনুসারে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলিকে দুটি ভাগে ভাগ করা যায়:
1. ট্রান্সমিশন ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি
পুরানো ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপগুলিতে, উত্তেজনা আলোর উত্সটি ফ্লুরোসেন্সকে উত্তেজিত করার জন্য একটি কনডেন্সারের মাধ্যমে নমুনা উপাদানের মধ্য দিয়ে প্রেরণ করা হয়। সুবিধা হল যে ফ্লুরোসেন্স কম ম্যাগনিফিকেশনে শক্তিশালী, কিন্তু অসুবিধা হল যে ম্যাগনিফিকেশন বাড়ার সাথে সাথে প্রতিপ্রভা কমে যায়। তাই এটি শুধুমাত্র বৃহত্তর নমুনা উপাদান পর্যবেক্ষণের জন্য উপযুক্ত।
2. এপি-ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি
উদ্দীপনা আলো বস্তুনিষ্ঠ লেন্স থেকে নমুনার পৃষ্ঠে নিচে পড়ে, অর্থাৎ, একই উদ্দেশ্যমূলক লেন্স আলোকসজ্জা কনডেন্সার এবং প্রতিপ্রভ সংগ্রহের জন্য উদ্দেশ্যমূলক লেন্স হিসাবে ব্যবহৃত হয়।
অপটিক্যাল পাথে একটি ডাইক্রোয়িক বিম স্প্লিটার (ডাইক্রোয়িক মিরর) যোগ করা প্রয়োজন, যা অপটিক্যাল অক্ষের সাথে 45o কোণ তৈরি করে। উত্তেজনা আলো বস্তুনিষ্ঠ লেন্সে প্রতিফলিত হয় এবং নমুনায় সংগ্রহ করা হয়। স্লাইড পৃষ্ঠ দ্বারা প্রতিফলিত উত্তেজনা আলো একই সময়ে উদ্দেশ্য লেন্সে প্রবেশ করে, দুই রঙের বিম স্প্লিটারে ফিরে আসে, ফ্লুরোসেন্স থেকে উত্তেজনা আলোকে আলাদা করে এবং অবশিষ্ট উত্তেজনা আলো ব্লকিং ফিল্টার দ্বারা শোষিত হয়। আপনি যদি বিভিন্ন উত্তেজনা ফিল্টার/টু-কালার বিম স্প্লিটার/ব্লকিং ফিল্টারগুলির সংমিশ্রণে পরিবর্তন করেন, তাহলে বিভিন্ন ফ্লুরোসেন্ট প্রতিক্রিয়া পণ্যের চাহিদা পূরণ করা যেতে পারে।
এই ধরনের ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের সুবিধা হল যে দৃশ্যের ক্ষেত্রের আলোকসজ্জা সমান, ইমেজিং পরিষ্কার এবং বৃহত্তর বিবর্ধন, ফ্লুরোসেন্স তত শক্তিশালী।
ফেজ কনট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপ
একটি ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপ হল একটি মাইক্রোস্কোপ যা আলো একটি বস্তুর মধ্য দিয়ে প্রশস্ততা (আলোর তীব্রতা) পরিবর্তনে উত্পন্ন ফেজ পার্থক্য (বা অপটিক্যাল পাথ পার্থক্য) রূপান্তর করতে পারে। এটি প্রধানত জীবন্ত কোষ, দাগহীন টিস্যু বিভাগ বা বৈপরীত্যের অভাবের দাগযুক্ত নমুনাগুলি পর্যবেক্ষণ করতে ব্যবহৃত হয়।
মানুষের চোখ শুধুমাত্র দৃশ্যমান আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্য (রঙ) এবং প্রশস্ততার পরিবর্তনগুলি সনাক্ত করতে পারে, তবে ফেজ পরিবর্তন নয়। যাইহোক, বেশিরভাগ জৈবিক নমুনাগুলি অত্যন্ত স্বচ্ছ, এবং আলোর তরঙ্গের প্রশস্ততা মূলত অপরিবর্তিত থাকে এর মধ্য দিয়ে যাওয়ার পরে এবং শুধুমাত্র পর্যায় পরিবর্তন হয়।
ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপ মূলত নমুনার মধ্য দিয়ে যাওয়া দৃশ্যমান আলোর অপটিক্যাল পাথের পার্থক্যকে একটি প্রশস্ততা পার্থক্যে পরিবর্তন করে, যার ফলে বিভিন্ন কাঠামোর মধ্যে বৈসাদৃশ্য উন্নত হয় এবং বিভিন্ন কাঠামো পরিষ্কারভাবে দৃশ্যমান হয়। আলোটি নমুনার মধ্য দিয়ে যাওয়ার পর প্রতিসৃত হয়, মূল অপটিক্যাল পথ থেকে বিচ্যুত হয় এবং একই সময়ে 1/4λ (তরঙ্গদৈর্ঘ্য) বিলম্বিত হয়। যদি এটি 1/4λ দ্বারা বৃদ্ধি বা হ্রাস করা হয়, অপটিক্যাল পথের পার্থক্য 1/2λ হয়ে যায়, এবং দুটি বিম অপটিক্যাল অক্ষের পরে হস্তক্ষেপ করে, প্রশস্ততা বৃদ্ধি বা হ্রাস করে, বৈসাদৃশ্য উন্নত করে।
কাঠামোগতভাবে, ফেজ কনট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপগুলি সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ থেকে আলাদা:
1. কণাকার মধ্যচ্ছদা একটি রিং খোলার সঙ্গে একটি ডায়াফ্রাম আছে, যা আলোর উৎস এবং কনডেনসারের মধ্যে ইনস্টল করা হয়। ফাংশন হল কনডেন্সারের মধ্য দিয়ে যাওয়া আলোকে একটি ফাঁপা আলোর শঙ্কু তৈরি করা এবং নমুনার উপর ফোকাস করা।
2. ফেজ প্লেট ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপ বস্তুনিষ্ঠ লেন্সের ভিতরে ম্যাগনেসিয়াম ফ্লোরাইডের প্রলেপযুক্ত একটি ফেজ প্লেট যোগ করে যাতে সরাসরি আলো বা বিচ্ছুরিত আলোর পর্যায় 1/4λ বিলম্বিত হয়। ফেজ প্লেটে দুটি অঞ্চল রয়েছে, যে অংশের মধ্য দিয়ে সরাসরি আলো যায় তাকে "কঞ্জুগেট সারফেস" বলা হয় এবং যে অংশের মধ্য দিয়ে বিচ্ছুরিত আলো যায় তাকে "ক্ষতিপূরণ পৃষ্ঠ" বলা হয়। ফেজ প্লেটগুলি তাদের কাজের প্রভাব অনুসারে দুটি প্রকারে বিভক্ত:
(1) একটি প্লাস ফেজ প্লেট: প্রত্যক্ষ আলো 1/4λ বিলম্বিত হয়, এবং আলোক তরঙ্গ দুটি সেটের প্রশস্ততা বৃদ্ধির জন্য একত্রিত হওয়ার পরে আলোক তরঙ্গগুলিকে সুপারিম্পোজ করা হয় এবং নমুনা গঠনটি পার্শ্ববর্তী মাধ্যমের চেয়ে উজ্জ্বল হয়, একটি গঠন করে উজ্জ্বল বৈসাদৃশ্য (বা নেতিবাচক বৈসাদৃশ্য)।
(2) বি প্লাস ফেজ প্লেট: বিচ্ছুরিত আলো 1/4λ বিলম্বিত হয়, এবং অক্ষ সারিবদ্ধ হওয়ার পরে আলোর দুটি গ্রুপের আলোক তরঙ্গ বিয়োগ হয় এবং প্রশস্ততা ছোট হয়। নমুনার গঠন আশেপাশের মাধ্যমের চেয়ে গাঢ়, একটি অন্ধকার বৈসাদৃশ্য (বা ইতিবাচক বৈসাদৃশ্য) গঠন করে। একটি ফেজ প্লেট সহ অবজেক্টিভ লেন্সকে ফেজ কন্ট্রাস্ট অবজেক্টিভ লেন্স বলা হয়, যা প্রায়ই অবজেক্টিভ লেন্স হাউজিং-এ "Ph" দিয়ে চিহ্নিত করা হয়।
