ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপির জন্য জৈবিক নমুনার প্রস্তুতি এবং পর্যবেক্ষণ
একটি মাইক্রোস্কোপের রেজোলিউশন ব্যবহৃত আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্যের উপর নির্ভর করে। ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ, যা 1933 সালে আবির্ভূত হতে শুরু করে, একটি আলোক উৎস হিসাবে দৃশ্যমান আলোর চেয়ে অনেক কম তরঙ্গদৈর্ঘ্য সহ একটি ইলেক্ট্রন রশ্মি ব্যবহার করে, যাতে এটি যে রেজোলিউশন অর্জন করতে পারে তা একটি অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের তুলনায় অনেক উন্নত হয়। আলোর উত্সের পার্থক্য ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ এবং অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের মধ্যে পার্থক্যের একটি সিরিজ নির্ধারণ করে।
ইলেক্ট্রন রশ্মি ইমেজিংয়ের নীতি এবং নমুনাগুলিতে অভিনয় করার বিভিন্ন উপায়ের পার্থক্য অনুসারে, আধুনিক ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপগুলি অনেক ধরণের মধ্যে বিকশিত হয়েছে। বর্তমানে, সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত হয় ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ এবং স্ক্যানিং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ। পূর্বের মোট বিবর্ধন 1000-1000000 এর মধ্যে হতে পারে। পরবর্তীটির মোট বিবর্ধন 20 এবং 300,000 বার এর মধ্যে পরিবর্তিত হতে পারে। এই পরীক্ষাটি প্রধানত দুটি ধরণের মাইক্রোস্কোপের নমুনা, ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ এবং স্ক্যানিং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ তৈরির প্রবর্তন করে।
2. সরঞ্জাম
1. ব্যাকটেরিয়া Escherichia coli (Escherichia coli) তির্যক।
2. দ্রবণ বা বিকারক অ্যামিল অ্যাসিটেট, ঘনীভূত সালফিউরিক অ্যাসিড, পরম ইথানল, জীবাণুমুক্ত জল, 2% সোডিয়াম ফসফোটাংস্টেট (pH 6.5-8.0) জলীয় দ্রবণ, 0.3% পলিথিন ফর্মালডিহাইড (ক্লোরোফর্মে দ্রবণীয়) দ্রবণ, কোষ পিগমেন্ট সি, অ্যামোনিয়াম অ্যাসিটেট, প্লাজমিড pBR322।
3. যন্ত্র বা অন্যান্য পাত্র: সাধারণ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ, তামার জাল, চীনামাটির বাসন ফানেল, বীকার, থালা, জীবাণুমুক্ত ড্রপার, জীবাণুমুক্ত টুইজার, পিন, স্লাইড, গণনা বোর্ড, ভ্যাকুয়াম লেপ মেশিন, ক্রিটিক্যাল পয়েন্ট ড্রায়ার ইত্যাদি।
3. অপারেশন পদক্ষেপ
(1) ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপির জন্য নমুনা প্রস্তুতি এবং পর্যবেক্ষণ
1. ধাতু জাল চিকিত্সা
অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপির নমুনাটি পর্যবেক্ষণের জন্য একটি কাচের স্লাইডে রাখা হয়। যাইহোক, ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপিতে, যেহেতু ইলেকট্রনগুলি কাচের শীট ভেদ করতে পারে না, জাল উপকরণগুলি কেবল বাহক হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে, সাধারণত ক্যারিয়ার নেট বলা হয়। বাহক জালকে বিভিন্ন উপকরণ এবং আকারের কারণে বিভিন্ন বৈশিষ্ট্যে ভাগ করা যেতে পারে, যার মধ্যে সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত হয় 200-400 জাল (গর্তের সংখ্যা) তামার জাল। ময়লা অপসারণ এবং এটি পরিষ্কার রাখার জন্য তামার জাল ব্যবহারের আগে অবশ্যই চিকিত্সা করা উচিত, অন্যথায় এটি সাপোর্ট ফিল্মের গুণমান এবং নমুনার ফটোগুলির স্বচ্ছতাকে প্রভাবিত করবে। এই পরীক্ষাটি একটি 400-জাল তামার জাল ব্যবহার করে, যা নিম্নরূপ চিকিত্সা করা যেতে পারে: প্রথমে, এটিকে অ্যামিল অ্যাসিটেট দিয়ে কয়েক ঘন্টা ভিজিয়ে রাখুন এবং ব্লিচ করুন, তারপরে এটিকে পাতিত জল দিয়ে কয়েকবার ধুয়ে ফেলুন এবং তারপরে পরম ইথানলে ভিজিয়ে রাখুন পানিশূন্যতা. উপরের পদ্ধতির পরেও যদি তামার জাল পরিষ্কার না হয় তবে আপনি এটিকে পাতলা ঘনীভূত সালফিউরিক অ্যাসিডে (1:1) 1 থেকে 2 মিনিটের জন্য ভিজিয়ে রাখতে পারেন, অথবা 1% NaOH দ্রবণে কয়েক মিনিটের জন্য সিদ্ধ করতে পারেন, পাতিত করে ধুয়ে ফেলতে পারেন। জল বেশ কয়েকবার, এবং তারপর ইথানলে অ্যানহাইড্রাস ডিহাইড্রেটে রাখুন এবং একপাশে সেট করুন।
2. সমর্থন ঝিল্লি প্রস্তুতি
নমুনাগুলি পর্যবেক্ষণ করার সময়, ক্যারিয়ার নেটটি একটি অসংগঠিত, অভিন্ন ফিল্মের স্তর দিয়ে আবৃত করা উচিত, অন্যথায় ক্যারিয়ার জালের গর্ত থেকে ছোট নমুনাগুলি বেরিয়ে যাবে। এই ফিল্মটিকে সাধারণত সাপোর্ট ফিল্ম বা ক্যারিয়ার ফিল্ম বলা হয়। সমর্থন ফিল্ম ইলেক্ট্রন স্বচ্ছ হওয়া উচিত, এবং এর বেধ সাধারণত 20nm কম হওয়া উচিত; ইলেক্ট্রন রশ্মির প্রভাবের অধীনে, কাঠামোগত স্থিতিশীলতা বজায় রাখার জন্য ফিল্মটির একটি নির্দিষ্ট যান্ত্রিক শক্তি থাকা উচিত এবং ভাল তাপ পরিবাহিতা থাকতে হবে; উপরন্তু, ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপিতে সমর্থন নেটওয়ার্ক ব্যবহার করা উচিত, নীচে কোনও দৃশ্যমান কাঠামো থাকা উচিত নয়, নমুনা বহন করার সাথে কোনও রাসায়নিক বিক্রিয়া করা উচিত নয় এবং নমুনা পর্যবেক্ষণে কোনও হস্তক্ষেপ করা উচিত নয়। এর পুরুত্ব সাধারণত প্রায় 15nm হয়। সাপোর্টিং ফিল্ম হতে পারে প্লাস্টিকের ফিল্ম (যেমন কোলোডিয়ন ফিল্ম, পলিথিন ফর্মালডিহাইড ফিল্ম, ইত্যাদি), কার্বন ফিল্ম বা মেটাল ফিল্ম (যেমন বেরিলিয়াম ফিল্ম ইত্যাদি)। স্বাভাবিক কাজের অবস্থার অধীনে, প্লাস্টিকের ফিল্ম প্রয়োজনীয়তা পূরণ করতে পারে। প্লাস্টিকের ফিল্মগুলির মধ্যে, কোলোডিয়ন ফিল্ম প্রস্তুত করা তুলনামূলকভাবে সহজ, তবে এর শক্তি পলিথিন ফর্মালডিহাইড ফিল্মের মতো ভাল নয়।
