গ্লাস স্লাইডের জন্য অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ পুরুত্বের প্রয়োজনীয়তা
মাইক্রোস্কোপিক ডিহাইড্রেশন এবং নমুনা সংযুক্তি: বারবার সেন্ট্রিফিউগেশনের কারণে, কোষগুলি হারিয়ে যায়, তাই অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপির জন্য একটি গ্লাস স্লাইড বা প্লাস্টিকের শীটের পৃষ্ঠের সাথে কোষগুলিকে সংযুক্ত করা ভাল, যাতে কোষগুলি নির্জীব হয়ে যায় এবং গ্লাসের সাথে একসাথে শুকিয়ে যায়। স্লাইড বা প্লাস্টিকের শীট। অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপিতে কাচের স্লাইডের পুরুত্বের প্রয়োজনীয়তা কোষগুলিকে কাচের স্লাইড বা প্লাস্টিকের শীটগুলির সাথে সংযুক্ত করার অনুমতি দেওয়ার জন্য, প্রথমে কাচের স্লাইড বা প্লাস্টিকের শীটে ফিল্মের একটি স্তর স্থাপন করা প্রয়োজন৷ ফিল্ম পাড়ার পদ্ধতি নিম্নরূপ:
(1) অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপির সবচেয়ে সহজ পদ্ধতি হল পলিভিনাইল ফর্মাল (ফর্মভার) ফিল্মের একটি পাতলা স্তর স্থাপন করা। পরিষ্কার করা স্লাইডগুলিকে (0.5-1) শতাংশ পলিভিনাইল ফর্মাল ক্লোরোফর্ম দ্রবণে ভিজিয়ে রাখুন। বায়ুমণ্ডল উদ্বায়ী হওয়ার পরে, স্লাইডে একটি সাদা ফিল্ম প্রদর্শিত হয়। ফিল্ম পরিবর্তন করতে ক্লোরোফর্মে স্লাইডগুলিকে কয়েকবার ঝাঁকান। পাতলা এবং ব্যবহারের জন্য প্রস্তুত।
(2) পরিষ্কার করা গ্লাস স্লাইডে 0.1 অক্ষাংশ পলি-এল-লাইসিন (প্রস্তুতির সময় 1 মিলি ফিল্টার করা জলে 1 মিলিগ্রাম পলি-লাইসিন দ্রবীভূত করুন) ড্রপ করুন এবং ফোঁটা ফুটে উঠার পরে এটি একটি 450C সাপ্লাই বক্সে রাখুন . শুকনো এই পদ্ধতিটি সর্বোত্তম কারণ পলি-এল-লাইসিন ইতিবাচকভাবে চার্জ করা হয়, যা আরও পৃষ্ঠের নেতিবাচক চার্জযুক্ত কোষগুলিকে সংযুক্ত করতে দেয়।
(3) গ্লিসারল প্রোটিন গঠনের জন্য স্লাইডের পুরুত্বের জন্য অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের প্রয়োজনীয়তা অনুযায়ী (30--40) শতাংশ এবং (3-5) শতাংশ অনুপাতে পাতিত জলে প্লাজমা এবং গ্লিসারল যোগ করুন। সমাধান তরলটি পরিষ্কার করা কাচের স্লাইডে ফেলে দেওয়া হয়, অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের নীচে উন্মোচিত এবং শুকানো হয়। প্রোটিন ফিল্মটিকে 2 শতাংশ গ্লুটারালডিহাইডে ডুবিয়ে প্রোটিন ঠিক করা হয়, পরে ব্যবহারের জন্য ধুয়ে শুকানো হয়। ব্যবহারের আগে, প্লাজমা প্রোটিন ফিল্মে ড্রপ করা হয় এটি "সক্রিয়" করুন, 30 মিনিটের পরে বাফার দিয়ে ধুয়ে ফেলুন, এবং এটি সরাসরি প্রয়োগ করা যেতে পারে।
স্থির এবং পরিষ্কার করা কোষগুলিকে একটি ডিজিটাল মাইক্রোস্কোপের নীচে ফিল্টার করা জল দিয়ে সেল সাসপেনশনের উপযুক্ত ঘনত্বে তৈরি করা হয় এবং অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপটি একটি কাঁচের স্লাইড বা প্লাস্টিকের শীটে রাখা হয় যা একটি ঝিল্লি দিয়ে আবৃত করা হয় এবং একটি আর্দ্র, নিম্ন স্তরে রাখা হয়। তাপমাত্রা (40C) পরিবেশ (30-120) মিনিট কোষগুলিকে ঝিল্লির সাথে সংযুক্ত করার অনুমতি দেয়। কাচের স্লাইডটি তুলতে এবং পরিষ্কার ডাবল পাতিত জলে ঝাঁকানোর জন্য সূক্ষ্ম চিমটি ব্যবহার করুন এবং একটি অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ দিয়ে অবিচ্ছিন্ন কোষগুলি ধুয়ে ফেলুন। অপটিক্যাল অণুবীক্ষণ যন্ত্রে স্লাইডের পুরুত্বের জন্য প্রয়োজনীয়তা পোলারাইজিং অণুবীক্ষণ যন্ত্রগুলি দ্রুত 50 শতাংশ অ্যাসিটোন (বা ইথানল) দিয়ে ভরা একটি পাত্রে স্থাপন করা হয়। ডিহাইড্রেশন প্রক্রিয়া হল প্রতি 3 মিনিটে ক্রমবর্ধমান ঘনত্ব সহ স্লাইডগুলিকে অ্যাসিটোন বা ইথানলে রাখা এবং অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ বা ক্রমাগত গ্লাস স্লাইড পাত্রে ডিহাইড্রেটিং এজেন্টের ঘনত্ব বৃদ্ধি করা। লেখকের পরীক্ষাগার অভিজ্ঞতা অনুসারে, পরবর্তী অপারেশনটি আরও সুবিধাজনক। অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপির নির্দিষ্ট পদ্ধতি প্রতি 3 মিনিটে পাত্রে থাকা ডিহাইড্রেটিং এজেন্টের অর্ধেক চুষতে পারে এবং তারপর 100 শতাংশ ঘনত্বের সাথে সমান পরিমাণে ডিহাইড্রেটিং এজেন্ট যোগ করতে পারে। 5-6 অপারেশনের পরে, মাইক্রোস্কোপ মূল্য জাহাজে ডিহাইড্রেটিং এজেন্টের ঘনত্ব 0.5 শতাংশের উপরে পৌঁছে যায় এবং কোষগুলি সফলভাবে ডিহাইড্রেটেড হয়। ক্রিটিক্যাল পয়েন্ট শুকানোর পরে, কাচের স্লাইড বা প্লাস্টিকের শীটটি ধাতব আবরণের জন্য পরিবাহী আঠালো দিয়ে নমুনা পিয়ারে আঠালো করা হয়। তৃতীয় পদ্ধতি দ্বারা নির্ধারিত ঝিল্লিতে কোষ সংযুক্ত করার সুবিধাও রয়েছে। অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ "সক্রিয়" প্রোটিন ফিল্মে গ্লুটারালডিহাইডের কম ঘনত্ব দ্বারা স্থির কোষগুলিকে ঝুলিয়ে দিতে পারে। অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের জন্য গ্লাস স্লাইডের পুরুত্ব 10 মিনিটের জন্য স্থাপন করা প্রয়োজন এবং গ্লাস স্লাইড বা প্লাস্টিকের শীটটি 2 শতাংশ গ্লুটারালডিহাইডে ভিজিয়ে রাখা হয়। 30 মিনিটের পরে, ফিল্টার করা ডাবল ডিস্টিল্ড ওয়াটার দিয়ে ধুয়ে ফেলুন এবং তারপরে উপরের পদ্ধতি অনুসারে ডিহাইড্রেট, শুকনো এবং ধাতব আবরণ দিন।
