লেজার কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ বৈশিষ্ট্য এবং অ্যাপ্লিকেশন
একটি সাধারণ অণুবীক্ষণ যন্ত্রে পর্যবেক্ষণের ইমেজ প্লেনটিকে প্রতিবেশী অক্ষীয় সমতল থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয় অবজেক্টিভ লেন্সের ফোকাল প্লেনকে ডিটেক্টরের সাথে ওভারল্যাপ করে, একটি কনফোকাল মাইক্রোস্কোপে এই বিচ্ছিন্নতা একটি বিচ্ছুরণ-সীমিত বিন্দু দিয়ে নমুনাকে আলোকিত করে অর্জন করা হয়। এই বিচ্ছিন্নতা অর্জন করতে এবং এইভাবে রেজোলিউশন উন্নত করতে আলোর এই বিন্দুর সংযোজিত ফোকাসে সংগৃহীত আলোর পথে একটি পিনহোল ব্যবহার করে আলো এবং ফিল্টারিং বিপথগামী আলো।
শুধুমাত্র কনজুগেট নমুনা স্তর থেকে প্রতিফলিত আলো সংগ্রহের আলোর পথের পিনহোলের মধ্য দিয়ে যেতে পারে, বাকি অপ্রাসঙ্গিক নমুনা স্তরের প্রতিফলনগুলি পিনহোল দ্বারা অবরুদ্ধ হয়। এটি রেজোলিউশনে একটি উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি দেয়। নীচে দেখানো হয়েছে বহুমাত্রিক ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি এবং একই পুরু নমুনার কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির পাশাপাশি তুলনা। যখন বিভিন্ন ফোকাল প্লেনে ছবিগুলির একটি সিরিজ নেওয়া হয়, তখন সাধারণত একটি "জেড-স্ট্যাক" হিসাবে উল্লেখ করা একটি চিত্র উত্পাদিত হয়, যা কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি দ্বারা প্রদত্ত রেজোলিউশন এবং বৈপরীত্য লাভ এবং এই লাভগুলির অন্তর্নিহিত কারণগুলি দেখায়। এটি দেখা যায় যে স্ট্যাকের উপরের চিত্রটি পরীক্ষা করলে যেখানে ইমেজিং প্লেন টিস্যুর উপরে রয়েছে ফ্লুরোসেন্স ছবিতে প্রচুর পরিমাণে বিক্ষিপ্ত আলো প্রকাশ করে, যেখানে কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ চিত্রটি কালো দেখায়। অক্ষীয় দিক থেকে পিএসএফ-এর এই হ্রাস সরাসরি জেড-স্ট্যাকের মাঝখানে অপটিক্যাল ইন্টারফেসে পরিলক্ষিত রেজোলিউশনের পার্থক্যে অবদান রাখে।
অপটিক্যাল স্লাইস স্ক্যানিং ইমেজিং
লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির আরেকটি বৈশিষ্ট্য হল এটি একটি স্ক্যানিং ইমেজিং কৌশল। প্রথাগত প্রশস্ত-ক্ষেত্রের আলোকসজ্জার কৌশলগুলি সম্পূর্ণ নমুনাকে আলোকিত করে যাতে চিত্রটি খালি চোখে বা একটি ডিটেক্টর দ্বারা সরাসরি ক্যাপচার করা যায়, কিন্তু LSCM নমুনার মাধ্যমে স্ক্যান করার জন্য এক বা একাধিক আলোক রশ্মি ব্যবহার করে, যাতে ফলস্বরূপ চিত্রটিকে বলা হয় একটি অপটিক্যাল স্লাইস, নিচের চিত্রে দেখানো হয়েছে। প্রথাগত ওয়াইড-ফিল্ড আলোকসজ্জা এবং লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল আলোকসজ্জার মধ্যে পার্থক্য নীচে দেখানো হয়েছে।
অতএব, আধুনিক কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির একটি ব্যবহারিক উপায় নীচের চিত্রে দেখানো হয়েছে। লেজার থেকে উত্তেজনা আলো একটি ডাইক্রোইক আয়নার মধ্য দিয়ে যায় এবং নমুনার x-দিক এবং y-দিক দিয়ে এক জোড়া গ্যালভানোমিটার আয়নার মাধ্যমে স্ক্যান করা হয় এবং নমুনার উত্তেজনা (বা প্রতিফলন) একটি পিনহোলের মধ্য দিয়ে PMT-এ যায়। ডিটেক্টর রেকর্ড করা হবে, এবং নমুনার একটি প্রকৃত চিত্র তৈরি করার জন্য রেকর্ড করা স্ক্যান করা চিত্রটি একটি কম্পিউটার দ্বারা পুনর্গঠিত হয়।
