কনফোকাল ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি সম্পর্কিত জ্ঞান
কনফোকাল ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির মূল নীতি হল নমুনাকে বিকিরণ করতে একটি বিন্দু আলোর উত্স ব্যবহার করা, ফোকাল প্লেনে একটি সুনির্দিষ্ট ছোট স্পট তৈরি করা। বিকিরণের পরে স্পট দ্বারা নির্গত ফ্লুরোসেন্স উদ্দেশ্যমূলক লেন্স দ্বারা সংগ্রহ করা হয় এবং মূল বিকিরণ পথ বরাবর একটি দ্বিমুখী রঙের আয়না দ্বারা গঠিত স্পেকট্রোফটোমিটারে ফেরত পাঠানো হয়। স্পেকট্রোফটোমিটার সরাসরি ডিটেক্টরে ফ্লুরোসেন্স পাঠায়। আলোর উৎস এবং সনাক্তকারীর সামনে দুটি পিনহোল রয়েছে, যথাক্রমে ইলুমিনেশন পিনহোল এবং সনাক্তকরণ পিনহোল। দুটির জ্যামিতিক মাত্রা সামঞ্জস্যপূর্ণ, প্রায় 100-200nm; ফোকাল সমতলে আলোক বিন্দুর সাথে তুলনা করে, দুটি সংযোজিত, যার অর্থ হল আলোক বিন্দুটি লেন্সের একটি সিরিজের মধ্য দিয়ে যায় এবং শেষ পর্যন্ত একই সাথে আলোকসজ্জা পিনহোল এবং সনাক্তকরণ পিনহোল উভয়ের উপর ফোকাস করতে পারে। এইভাবে, ফোকাল প্লেন থেকে আলো সনাক্তকরণ গর্তের সীমার মধ্যে একত্রিত হতে পারে, যখন ফোকাল প্লেনের উপরে বা নীচে থেকে বিক্ষিপ্ত আলো সনাক্তকরণ গর্তের বাইরে অবরুদ্ধ থাকে এবং চিত্রিত করা যায় না। একটি লেজারের সাহায্যে নমুনা বিন্দু স্ক্যান করার মাধ্যমে, পিনহোল সনাক্ত করার পরে ফটোমাল্টিপ্লায়ার টিউবটি বিন্দু দ্বারা আলোক বিন্দু বিন্দুর অনুরূপ কনফোকাল চিত্রও পায়, যা একটি ডিজিটাল সংকেতে রূপান্তরিত হয় এবং কম্পিউটারে প্রেরণ করা হয়। অবশেষে, পুরো ফোকাল প্লেনের একটি পরিষ্কার কনফোকাল চিত্র পর্দায় সংশ্লেষিত হয়।
প্রতিটি ফোকাল সমতল চিত্র আসলে নমুনার একটি অপটিক্যাল ক্রস-সেকশন, যার সর্বদা একটি নির্দিষ্ট বেধ থাকে, এটি একটি অপটিক্যাল পাতলা বিভাগ নামেও পরিচিত। কেন্দ্রবিন্দুতে আলোর তীব্রতা নন-ফোকাল পয়েন্টের তুলনায় অনেক বেশি এবং নন-ফোকাল প্লেন আলো পিনহোল দ্বারা ফিল্টার আউট হওয়ার কারণে, কনফোকাল সিস্টেমের ক্ষেত্রের গভীরতা প্রায় শূন্য। জেড-অক্ষের দিক বরাবর স্ক্যান করা অপটিক্যাল টমোগ্রাফি অর্জন করতে পারে, পর্যবেক্ষণ করা নমুনার ফোকাল স্পটে একটি দ্বি-মাত্রিক অপটিক্যাল স্লাইস তৈরি করে। Z-অক্ষ (অপটিক্যাল অক্ষ) স্ক্যানিংয়ের সাথে XY সমতল (ফোকাল প্লেন) স্ক্যানিংকে একত্রিত করে, দ্বি-মাত্রিক চিত্রগুলির অবিচ্ছিন্ন স্তরগুলি জমা করে এবং বিশেষ কম্পিউটার সফ্টওয়্যার দিয়ে প্রক্রিয়াকরণ করে নমুনার একটি ত্রিমাত্রিক চিত্র পাওয়া যেতে পারে।
সনাক্তকরণ পিনহোল এবং আলোর উত্স পিনহোল সর্বদা একই বিন্দুতে ফোকাস করা হয়, যাতে ফোকাসিং প্লেনের বাইরে উত্তেজিত প্রতিপ্রভ সনাক্তকরণ পিনহোলে প্রবেশ করতে না পারে।
লেজার কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির কার্যকারী নীতির সহজ অভিব্যক্তি হল যে এটি আলোর উত্স হিসাবে একটি লেজার ব্যবহার করে এবং ঐতিহ্যগত ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি ইমেজিংয়ের ভিত্তিতে একটি লেজার স্ক্যানিং ডিভাইস এবং একটি কনজুগেট ফোকাসিং ডিভাইস যোগ করে। এটি ডিজিটাল ইমেজ অধিগ্রহণ এবং প্রক্রিয়াকরণের জন্য একটি কম্পিউটার দ্বারা নিয়ন্ত্রিত একটি সিস্টেম।
