কনফোকাল ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির মৌলিক কাঠামো
(1) স্ক্যানিং মডিউল
স্ক্যানিং মডিউলে প্রধানত একটি পিনহোল লাইট বার (অপটিক্যাল স্লাইসগুলির পুরুত্ব নিয়ন্ত্রণ), একটি বর্ণালী স্কোপ (তরঙ্গদৈর্ঘ্য অনুযায়ী আলোর প্রচারের দিক পরিবর্তন করা), একটি নির্গমন ফ্লুরোসেন্স কলোরিমিটার (শনাক্ত করার জন্য একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্য সীমার মধ্যে আলো নির্বাচন করা) এবং একটি আবিষ্কারক (ফটো মাল্টিপ্লায়ার টিউব)। ফ্লুরোসেন্ট নমুনায় মিশ্র ফ্লুরোসেন্স স্ক্যানারে প্রবেশ করে এবং সনাক্তকরণ পিনহোল লাইট বার, স্পেকট্রোমিটার এবং কলোরিমিটার দ্বারা নির্বাচিত হওয়ার পরে, এটি বিভিন্ন একরঙা প্রতিপ্রভাতে বিভক্ত হয়, যা বিভিন্ন ফ্লুরোসেন্স চ্যানেলে সনাক্ত করা হয় এবং অনুরূপ কনফোকাল চিত্র তৈরি করে। একই সময়ে, বেশ কয়েকটি সমান্তরাল একরঙা ফ্লুরোসেন্স চিত্র এবং তাদের যৌগিক চিত্রগুলি কম্পিউটার স্ক্রিনে প্রদর্শিত হতে পারে।
(2) ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি সিস্টেম
মাইক্রোস্কোপ LSCM এর প্রধান উপাদান, যা সিস্টেমের ইমেজিং মানের সাথে সম্পর্কিত। মাইক্রোস্কোপ অপটিক্যাল পাথ সহজেই ইমেজিং গুণমান এবং পরিমাপের নির্ভুলতাকে প্রভাবিত না করে অপটিক্যাল বিকল্প সহ একটি অসীম দূরবর্তী অপটিক্যাল সিস্টেমে প্রবেশ করানো যেতে পারে। উদ্দেশ্য একটি বড় সংখ্যাসূচক অ্যাপারচার ফ্ল্যাট ফিল্ড apochromatic উদ্দেশ্য হওয়া উচিত, যা ফ্লুরোসেন্স অধিগ্রহণ এবং পরিষ্কার ইমেজিংয়ের জন্য উপকারী। অবজেক্টিভ লেন্স গ্রুপের রূপান্তর, রঙ ফিল্টার গ্রুপের নির্বাচন, স্টেজের মুভমেন্ট অ্যাডজাস্টমেন্ট, এবং ফোকাল প্লেনের মেমরি লকিং সবই কম্পিউটার দ্বারা স্বয়ংক্রিয়ভাবে নিয়ন্ত্রণ করা উচিত।
লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপিতে ব্যবহৃত ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপটি সাধারণত একটি প্রচলিত ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের মতোই, তবে এর নিজস্ব বৈশিষ্ট্য রয়েছে: এটি একটি স্ক্যানারের সাথে সংযুক্ত করা প্রয়োজন, যাতে লেজারটি নমুনাটিকে বিকিরণ করতে মাইক্রোস্কোপের উদ্দেশ্য প্রবেশ করতে পারে এবং তৈরি করতে পারে। নমুনা দ্বারা নির্গত ফ্লুরোসেন্স ডিটেক্টরে পৌঁছায়; একটি হালকা পথ রূপান্তর ডিভাইস প্রয়োজন, যা পারদ আলোকে লেজারে রূপান্তর করে এবং পারদ বাতির আলোর তীব্রতা সামঞ্জস্য করা যায়।
(3) সাধারণ লেজার
লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপিতে ব্যবহৃত লেজারের উত্সগুলির মধ্যে রয়েছে একক লেজার এবং মাল্টি লেজার সিস্টেম, এবং সাধারণত ব্যবহৃত লেজারগুলির মধ্যে নিম্নলিখিত তিনটি প্রকার রয়েছে:
সেমিকন্ডাক্টর লেজার: 405nm (অতিবেগুনী বর্ণালী লাইনের কাছাকাছি)
আর্গন আয়ন লেজার: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (নীল সবুজ আলো)
He-Ne লেজার: 543nm (সবুজ আলো He-Ne সবুজ লেজার) 633nm (লাল আলো He-Ne লাল লেজার)
ইউভি লেজার (ইউভি লেজার): 351 এনএম, 364 এনএম (ইউভি লাইট)
(4) সহায়ক সরঞ্জাম
এয়ার কুলড, ওয়াটার-কুলড কুলিং সিস্টেম এবং নিয়ন্ত্রিত পাওয়ার সাপ্লাই।
একটি লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপের মূল কাজের নীতি হল প্রথমে লেজার থেকে উত্তেজনা আলোর একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্য নির্গত করা। পরিবর্ধনের পরে, আলো স্ক্যানারে আলোকিত পিনহোল আলোক দণ্ডের মধ্য দিয়ে যায় এবং একটি বিন্দু আলোর উত্স তৈরি করে। অবজেক্টিভ লেন্সটি নমুনার ফোকাল প্লেনে ফোকাস করে এবং নমুনার সাথে সম্পর্কিত আলোকিত বিন্দুগুলি উত্তেজিত হয় এবং প্রতিপ্রভ নির্গত করে। ডিটেকশন হোল লাইট বারের মধ্য দিয়ে যাওয়ার পর, এটি ডিটেক্টরে পৌঁছায় এবং কম্পিউটার মনিটরিং স্ক্রিনে চিত্রিত হয়। এইভাবে, ফোকাল সমতলে নমুনার প্রতিটি বিন্দুর ফ্লুরোসেন্স ইমেজ দ্বারা একটি সম্পূর্ণ কনফোকাল চিত্র তৈরি হয়, যাকে হালকা স্লাইস বলা হয়।
